[发明专利]一种用电化学活性开关适配体信标检测蛋白的方法

权利要求书

1.一种用电化学活性开关适配体信标检测蛋白的方法，其特征在 于，具体操作步骤：

第一步电化学活性开关适配体信标的合成

每1.0OD核酸适配体量合成时取30μL 3.3×10^-3molL^-1的胭脂红 酸溶液和加入20mg咪唑，调节该溶液的pH值6.5，室温下羧基活化 30分钟，在偶联剂12mgEDC和27mgNHS存在下，加入含1.0OD两 端修饰有氨基的具有茎环结构特定序列核酸的核酸适配体PBS溶液， 调节该PBS溶液的pH值至7.3和溶液体积为400μL，在冰水浴下搅 拌24小时，透析袋于PBS溶液中透析48小时，去除未与核酸偶联 的胭脂红酸，用HPLC方法提纯，得到浓度不低于1×10^-5molL^-1的电 化学活性开关适配体信标，4℃冰箱中保存备用；

第二步检测样品中特定蛋白分子

在含有待测的特定蛋白分子的PBS溶液的样品中，加入50μL 1×10^-5molL^-1的第一步得到的电化学活性开关适配体信标，控制PBS 溶液的培育条件为PBS溶液的pH＝7.3、[Mg²⁺]＝1.0mmol/L和 [Na⁺]＝1.0mol/L，37℃下培育30分钟，电化学检测以PBS溶液为电 解液，采用羧基化的碳纳米管修饰电极为工作电极，Ag/AgCl电极为 参比电极，铂电极为对电极，用DPV，即示差脉冲伏安法进行检测， 在0.2～0.9V范围扫DPV，记录0.72V处的氧化峰电流值，该氧化峰 电流与样品中特定蛋白分子浓度呈线性关系。