[发明专利]重组蓝藻抗病毒蛋白的制备方法及应用

说明书

技术领域

本发明涉及基因工程技术领域，具体涉及一种重组蓝藻抗病毒蛋白的制备方法，以及此 方法中涉及的表达载体和寄主细胞，本发明还涉及所述表达载体和/或寄主细胞和/或所述方法 得到的重组蓝藻抗病毒蛋白在制备抗病毒药物中的应用。

背景技术

蓝藻抗病毒蛋白N(CVN)是一种从蓝藻，又名蓝细菌Cyanobacteria(Nostoc ettipsosporum)中分离得到的一种水溶性糖蛋白，其独特的抗病毒活性最初是在一项抗人类 免疫缺陷病毒(human immunodefiiciency virus，HIV)天然药物筛选计划中发现的[Boyd MR， Gustafson KR，McMahon JB，et al.Discovery of cyanovirin-N，a novel human immunodefiiciency virus-inactivating protein that binds viral surface envelope glycoprotein gp120： potential applications to microbicide development[J].Antimicrob.Agents Chemother，1997，41 (7)：1521—1530.]。后来的研究表明其具有广泛的抗病毒作用。天然CVN相对分子质量为 11kD，一级结构含有101个氨基酸残基，无翻译后的修饰，带有两个内部二硫键。CVN能特 异地、高亲合性地结合在人免疫缺陷病毒HIV-1的衣壳蛋白gp120上有效降低HIV-1病毒对细 胞的感染[Bewley CA，Gustafson KR，Boyd MR，et al.Solution structure of cyanovirin—N， a potent HIV—inactivating protein[J].Nat Struct Biol，1998，5(7)：571.]。此外CVN对流感 病毒、埃博拉病毒、疱疹病毒和黄热病病毒、副流感病毒、丙型肝炎病毒[O’Keefe BR，Smee DF，Turpin JA，et al.Potent anti-inflluenza activity of cyanovirin-N and interactions with viral hemagglutinin[J].Antimicrob Agents Chemother，2003，47(8)：2518.，Barrientos LG， O’Keefe BR，Bray M，et al.Cyanovirin-N binds to the viral surface glycoprotein gp1，2and inhibits infectivity ofthe Ebola virus[J].Antiviral Research，2002，58(1)：47256.]等都有诘 抗作用。早在CVN发现之初，CVN的重组表达研究就已经开始，目前已在大肠杆菌，酵母菌 和植物细胞中表达成功，但这些重组表达方法存在表达产量低，易形成包涵体且复性困难， 易形成无活性的二聚体形式，融合表达出现氨基酸缺失，纯化方法复杂等缺点[Mori T， Gustafson KR，Pannell LK，et al.Recombinant production of cyanovirin-N，a potent human immunodefiiciency virus-inactivating protein derived from a cultured cyanobacterium[J].Protein Expr Purif，1998，12(2)：151.，Mori T，Barrientos LG，Han Z，et al.Functional homologs of cyanovirin-N amenable to mass production in prokaryotic and eukaryotic hosts[J].Protein Expr Purif，2002，26(1)：42.，Colleluori DM，Tien D，Kang F，et al.Expression，purifiication， and characterization of recombinant cyanovi-rin-N for vaginal anti-HIV microbicide development[J].Protein Expr Purif，2005，39(2)：229.，Sexton A，Drake PM，Mahmood N，et al.Transgenic plant production of Cyanovirin-N，an HIV microbicide[J].FASEB J，2006， 20(2)：356.]。