[发明专利]与牛精液品质性状相关的INHβA基因片段作为分子标记的应用

说明书

技术领域

本发明属于家畜分子标记制备技术领域，具体地说涉及一种与牛精液品质性状相关INHβA基因片段作为分子标记的应用。

背景技术

我国牛品种资源十分丰富，黄牛的存栏量占世界第一位。国家自从1972年筹建种公牛站，投入大量资金从国外引进优秀种公牛生产冻精，在全国范围内推广牛的人工授精技术，大规模地采用牛冷冻精液配种，加快了黄牛改良的步伐。牛的精液冷冻和人工授精是一项早已投入生产的生物技术，在牛的品种改良和生产上发挥着巨大作用，因此，牛的精液品质的好坏直接影响着该技术带来的经济效益。研究表明，精液品质不仅受营养和环境因素影响，而且与受公畜本身遗传因素有关。目前，对种公牛种用价值评定，主要采用后裔测定法，此法周期长，投入大，采用分子标记辅助选择不失为一条捷径，此方法可提供种公牛早期选择和部分替代种公牛后裔测定，从而可以节省大量的时间和成本提高经济效益。

抑制素(Inhibin，INH)是下丘脑-垂体-性腺轴调控系统的重要激素，由α亚基和β亚基两种形式，其中α亚基分子量为18kD；β亚基分子量为14kD；β亚基有βA和βB两种形式，其主要作用是通过脑垂体对FSH的合成和分泌进行负反馈调节。

姜庆林等(2005)发现抑制素(Inhibin，INH)主要由雌性动物卵巢颗粒细胞和雄性动物睾丸支持细胞分泌。Phillips(2005)报道在人、小鼠、猪、牛、绵羊等多个物种的卵巢、睾丸和子宫等生殖系统中均有表达。Matzuk et al.(1995)研究发现βA亚基可能参与早期胚胎的发育和雌性动物的受精过程。Hiendleder et al(1996)发现INHβA基因对绵羊产羔数有显著影响。薛昱等(2004)提出抑制素基因作为繁殖性能的候选基因。关于精液品质分子标记研究，在人和猪中均有报道。2004年有研究表明人雄激素受体(AR)基因CAG重复长度频数分布在畸精者和正常者之间有显著不同。王利权(2006)报道特发性无精子症患者血清FSH水平和睾丸组织的FSHR表达水平与睾丸精子发生程度之间存在相关性。S.Y.Huang等(2002)把热休克蛋白70.2基因与猪的精液品质进行关联分析，表明：猪的HSP70.2基因5’端侧翼区的单核苷酸多态性和炎热季节里精液品质性状是相关的。Lin等(2005)以GnRHR，PRL，PRLR，FSHβ，LHβ，FST，INHA，INHβA和INHβB为候选基因，研究其对猪的精液品质的影响，结果表明GnRHR与精子的活力、畸形率具有相关性；而INH与精子的浓度具有相关性。Lin et al(2006)做了β肌动蛋白基因与猪的精液品质和生产性能的关联分析，结果表明单倍型和精子的运动力、畸形率、胎产活仔数有关。雷雪芹等(2003)对FSHR基因5’端做了标记研究，发现其在一个品种内单胎母牛和双胎母牛之间有一定趋势。Kleeff et al(1998)报道人INHβA基因可以作为胰腺癌发生的标记基因。目前，关于抑制素对动物繁殖性能的研究主要集中在母畜上，关于INHβA基因对牛精液品质性状影响的研究尚未见报道。

发明内容

本发明的目的在于通过对牛精液品质性状INHβA基因片段序列进行多态性分析，为公牛的标记辅助选择提供一种分子标记。本发明涉及分子标记在牛精液品质性状关联分析上的应用，还涉及检测牛精液品质性状INHβA基因片段分子标记的制备方法。

本发明通过以下技术方案实现：

申请人通过分子生物学方法获得一种作为分子标记的牛INHβA基因片段，它的核苷酸序列如序列表SEQ ID NO：1所述。在序列表SEQID NO：1所示的核苷酸序列的150bp处有1个C150-T150的碱基替换，导致StyI-RFLP多态性。

同时设计了检测牛INHβA基因片段的碱基突变的引物对，所述的引物对的正向引物为5’-GGTGGTTGTTACTGTTTATC-3’，反向引物为5’-CAGGGTTTCAGAAGTTGG-3’。

建立了一种筛选INHβA基因在牛群体中多态性的方法，其步骤如下：

1)从牛精液基因组中提取DNA，以牛INH βA基因片段核苷酸序列为模板设计引物，进行PCR扩增，PCR产物回收、纯化和测序，获得如序列表SEQ ID NO：1所述的核苷酸序列；

2)采用PCR-RFLP方法检测牛基因INHβA片段C150T的多态性。

对本发明更详细描述参见实施例部分。

附图说明

图1：是本发明的技术流程图。

图2：是牛INHβA基因片段序列琼脂糖凝胶电泳图谱。