[发明专利]一种检测血样中的PON-1酶活性的方法及应用

说明书

技术领域

本发明涉及医疗技术领域，更具体涉及一种对血浆或血清中对氧磷酯酶1(PON-1)酶活性检测的方法，同时还涉及一种PON-1酶活性在冠心病、心肌梗塞等心脑血管疾病的实验室辅助诊断、早期检测、风险评估及治疗监测中的应用。

背景技术

动脉粥样硬化(As)所致的冠心病、中风等心脑血管疾病是严重危害人类健康的“头号杀手”。As的发生与机体血脂代谢紊乱密切相关，大量流行病学调查证实血浆高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)水平与冠心病的发生呈负相关，因而被公认为抗As的保护因子。HDL抗As作用主要包括介导胆固醇逆向转运、抗氧化及抗炎症，也涉及抗血栓、保护内皮功能等。但近来也有充分资料显示：HDL的载脂蛋白AI(apo AI)发生Arg173→Cys突变的个体中，表现为极低的HDL-C水平，其As发生率反而降低；在炎症状态和一些相关的代谢性疾病中，有较高HDL-C水平的个体，仍会有心脏病和中风发作，其HDL的抗As功能丧失，甚至出现致As的作用，引起这种“失功能性HDL”的原因主要包括HDL的颗粒组成、代谢及相关的生物学活性等方面的变化。胆固醇酯转运蛋白(CETP)抑制剂Torcetrapib的临床研究显示，该药虽然显著升高HDL-C浓度，但治疗组患者的病死率却显著高于对照组，也至少说明血浆HDL-C水平并不能准确反映HDL对血管的保护作用。因此检测HDL-C水平高低并不能完全反映机体HDL抗As的能力及As的危险性。

HDL是一种脂质和蛋白含量大致均等的异质性脂蛋白，组成包括多种载脂蛋白、甘油三酯、磷脂、胆固醇及其酯，其中载脂蛋白包括apoAI(占65-70％，是决定HDL结构与功能的主要蛋白成分)，apoAII(20-25％)，apoAIV，apoAV，apo C，apo D，apo E，apo J，apo L等。由于HDL在组成、大小、形状、密度等性质呈现极不均一性，国内外基础研究者一直关注HDL亚类的分布、组成与冠心病的密切关系，如HDL的LpA-I型比LpA-II型抗As的能力较强；HDL₂、HDL₃及前β-HDL的抗As作用明显不同，但这些亚型都不足以准确反映HDL抗As功能差异，所涉及的检测方法复杂，在临床上又不能常规实施，作为临床As预示指标的局限性是显而易见的。

急、慢性炎症状态下，HDL脂质及载脂蛋白组成发生改变：甘油三酯比例升高、胆固醇酯减少，游离胆固醇含量增多，磷脂含量降低；apo AI显著降低且发生氧化、糖基化修饰；apoAIV、apoAV作为炎症感染的急性期蛋白增加，等。结构与组成的变化必然使HDL性质及生物学功能受到影响，在急性期炎症、感染、代谢性疾病(2型糖尿病、代谢综合征)以及早发冠心病患者中除常伴有HDL-C浓度降低，其甘油三酯比例升高，HDL核心的胆固醇酯被甘油三酯置换，apoAI被血清淀粉样物质A(SAA)置换，使HDL对胆固醇清除能力下降，其接受氧化磷脂的能力也降低，表现HDL抗氧化和抗炎活性下降，同时与HDL抗脂质氧化相关的酶—对氧磷酯酶1(PON-1)、血小板活化因子乙酰水解酶(PAF-AH)、卵磷脂胆固醇酰基转移酶(LCAT)等活性也降低，使致炎的氧化磷脂灭活障碍，HDL的抗炎活性甚至可转变为致炎活性，同时也不能抗氧化。目前临床上已发现部分代谢综合征和糖尿病患者，虽然HDL-C浓度降低不明显甚至升高，但由于存在这种丧失抗炎抗氧化功能的“失功能性HDL”，反而促发As斑块的发生发展。