[发明专利]同时分析毒死蜱和甲基对硫磷的酶联免疫吸附测定试剂盒

说明书

(一)技术领域

本发明涉及一种同时适用于针对残留毒死蜱和甲基对硫磷进行分析的酶联免疫吸附测定试剂盒，该试剂盒主要适用于快速测定批量的水样、土壤等环境样品和中毒样品及蔬菜等食品样品中的毒死蜱和甲基对硫磷残留。属于残留农药检测领域。

(二)背景技术

农药及其代谢物传统的残留分析方法主要是依靠气相色谱(GC)、高效液相色谱(HPLC)、质谱(MS)等物理化学分析手段，但由于农药使用规模不断扩大，农药残留造成环境影响和人类健康的慢性和长期效应日益受到人们关注和担忧，对农药残留的限制也越来越严格，对分析测定对象、种类、数量、范围、指标等诸方面都提出了新的要求和更高的标准，但传统的理化分析方法通常繁琐复杂，工作量大，仪器昂贵，并要有熟练的技术人员及较长的分析周期。因此人们迫切希望有一种简单、快速、灵敏及廉价的检测技术能在野外和实验室内进行大批量的检测应用。免疫分析法正具备这些优点，所以尽管将免疫分析用于农药残留分析的时间很短，仍然很快用于环境样品和食品样品中农药残留的分析。

毒死蜱(Chlorpyrifos)，自1965年由美国Dow公司开发推广后即作为一种广谱性高效杀虫剂，在世界范围内广泛应用于粮食、棉花等经济作物的多种害虫防治，并且对地下害虫、家畜害虫以及卫生害虫也有很好的防治效果。但是由于毒死蜱对人畜的毒性相当高，近年来，因毒死蜱中毒的报道，仍然屡见不鲜。尤其是在作物和蔬菜上的大量使用，对人体健康造成极大的危害，这已引起人们的关注。甲基对硫磷(Parathion-methyl)由1944年德国希拉台尔(G.Schrader)化学家首先合成，1949年拜尔公司首先建厂生产，嗣后世界各地大量有多家公司相继投产，上世纪60年代之后我国产、用量都很大。甲基对硫磷作为一种广谱性高效杀虫剂，在世界范围内广泛应用于粮食、棉花等经济作物的害虫防治。但是由于甲基对硫磷对人畜剧毒，因甲基对硫磷中毒的报道，屡见不鲜，目前我国虽然已经禁止生产和使用甲基对硫磷。开发一种简单快速同时适用于毒死蜱和甲基对硫磷农药残留现场监控的痕量分析方法具有重要的现实意义。

检测毒死蜱和甲基对硫磷残留量常规方法为高效液相色谱法等。然而该方法的灵敏度受样品的净化、浓缩等步骤的影响很大，且该方法需要昂贵的仪器，且过程繁琐，不适合大批量样品的检测与分析。免疫分析为毒死蜱和甲基对硫磷的残留检测提供了一个新的分析检测途径。要将免疫分析方法运用到实际中，则需要将其制备成试剂盒。现有技术公开了多种试剂盒，其中包括了检测甲基对硫磷、毒死蜱等残留物的试剂盒及其制备方法。而现有技术中没有关于方便同时检测毒死蜱和甲基对硫磷的技术。

本发明正是针对这一空白，经过发明人长时间的实验和测试，得到了一种适用于同时针对毒死蜱和甲基对硫磷残留分析的酶联免疫吸附测定试剂盒。

(三)发明内容

【要解决的问题】

本发明的目的是提供一种同时检测毒死蜱和甲基对硫磷残留的酶联免疫吸附测定试剂盒。

本发明的另一目的是提供一种具有高特异性、高灵敏度，操作方法简单快速，并能用于大批量样品同时快速检测残留毒死蜱和甲基对硫磷的试剂盒。

【技术方案】

本发明涉及一种同时用于毒死蜱和甲基对硫磷残留分析的酶联免疫吸附测定试剂盒，它基于免疫反应和酶促反应，包括盒体、设在盒体内的酶标板和/或试管和设在盒体内的试剂，其特征在于，在酶标板的每个孔内含有抗毒死蜱和甲基对硫磷通用包被抗原，盒内试剂包含抗毒死蜱和甲基对硫磷共同抗体、毒死蜱和甲基对硫磷标准溶液、酶标记抗毒死蜱和甲基对硫磷共同抗体。盒内试剂还包含洗涤液、底物稀释液、底物溶液和反应终止液。

在具体的实施方案中，本发明试剂盒包括盒体、设在盒体内的96孔/40孔酶标板/试管和设在盒体内的试剂。在所述酶标板的每个孔内，吸附着由包被液包被能与抗毒死蜱和甲基对硫磷共同抗体特异性结合反应的通用包被抗原，并用5％明胶进行封闭，盒内试剂包含洗涤液(稀释液)、底物稀释液、抗毒死蜱和甲基对硫磷共同抗体(间接ELISA)、毒死蜱和甲基对硫磷标准溶液、酶标毒死蜱和甲基对硫磷共同抗体例如辣根过氧化物酶标记羊抗兔共同抗体(适用于间接竞争ELISA法)或辣根过氧化物酶标记抗毒死蜱和甲基对硫磷兔共同抗体(适用于直接竞争ELISA法)、底物溶液和反应终止液。

其中固相通用包被抗原的制备及盒体内试剂组成如下：