[发明专利]一种龙血竭提取物及其制备方法和用途

权利要求书

1.一种龙血竭提取物，以3-甲氧基白藜芦醇和龙血素B计，以重量百分 比计，其中总酚的含量为50％以上；其中龙血素A的含量在0.5-4.0％，龙血素B 的含量在0.4-2.0％，白藜芦醇0.1-2.0％，紫檀芪的含量在0.3-4.0％，3-甲氧基白 藜芦醇0.1-2.5％。

2.根据权利要求1所述的龙血竭提取物，其中以3-甲氧基白藜芦醇和龙血 素B计，以重量百分比计，其中总酚的含量为55％以上；其中龙血素A的含量 在0.6-3.0％，龙血素B的含量在0.5-1.0％，白藜芦醇的含量在0.2-1.0％，紫檀芪 的含量在0.5-2.0％，3-甲氧基白藜芦醇的含量在0.2-1.0％。

3.根据权利要求2所述的龙血竭提取物，其中以3-甲氧基白藜芦醇和龙血 素B计，以重量百分比计，其中总酚的含量为60％以上；其中龙血素A的含量 在0.6-2.0％，龙血素B的含量在0.5-0.8％，白藜芦醇的含量在0.2-0.8％，紫檀芪 的含量在0.5-2.0％，3-甲氧基白藜芦醇的含量在0.2-0.8％。

4.一种包含上述权利要求1至3中任一权利要求所述龙血竭提取物的药物 组合物。

5.根据权利要求4所述的药物组合物，其中该药物组合物制成片剂、胶囊 剂、滴丸、软胶囊、或口服溶液。

6.权利要求1至3中任一权利要求所述龙血竭提取物的制备方法，包括如 下步骤：

步骤一：取龙血竭原料药，加入60％-100％体积比乙醇至全部溶解，加入蒸 馏水至含醇量为30％-55％体积比，过滤，取上清液，沉淀部分重复上述操作2-10 次，上清液合并；

步骤二：上清液过大孔吸附树脂柱或聚酰胺柱，4-16倍柱体积的30％-50％ 体积比乙醇洗脱，洗脱液弃去，用4-16倍柱体积的80％-95％体积比乙醇洗脱， 洗脱液回收溶剂至干，即得龙血竭提取物，其中所述的大孔吸附树脂选自弱极性 或中等极性的大孔吸附树脂。

7.根据权利要求6所述的制备方法，包括如下步骤：

步骤一：取龙血竭原料药，加入80％-100％体积比乙醇至全部溶解，加入蒸 馏水至含醇量为35％-45％体积比，过滤，取上清液，沉淀部分重复上述操作3-6 次，上清液合并；

步骤二：上清液过大孔吸附树脂柱或聚酰胺柱，6-12倍柱体积的35％-45％ 体积比乙醇洗脱，洗脱液弃去，用6-12倍柱体积的80％-95％体积比乙醇洗脱， 洗脱液回收溶剂至干，即得龙血竭提取物，其中所述的大孔吸附树脂选自弱极性 或中等极性的大孔吸附树脂。

8.根据权利要求7所述的制备方法，包括如下步骤：

步骤一：取龙血竭原料药，加入95％体积比乙醇至全部溶解，加入蒸馏水至 含醇量为40％体积比，过滤，取上清液，沉淀部分重复上述操作3-6次，上清液 合并；

步骤二：上清液过大孔吸附树脂柱或聚酰胺柱，8-10倍柱体积的40％体积 比乙醇洗脱，洗脱液弃去，用8-10倍柱体积的95％体积比乙醇洗脱，洗脱液回 收溶剂至干，即得龙血竭提取物，其中所述的大孔吸附树脂选自弱极性或中等极 性的大孔吸附树脂。

9.根据权利要求6至8中任一权利要求所述的制备方法，包括如下步骤：

步骤一：取龙血竭原料药，加入95％体积比乙醇至全部溶解，加入蒸馏水至 含醇量为40％体积比，过滤，取上清液，沉淀部分重复上述操作5次，上清液合 并；

步骤二：上清液过大孔吸附树脂柱或聚酰胺柱，8倍柱体积的40％体积比乙 醇洗脱，洗脱液弃去，用8倍柱体积的95％体积比乙醇洗脱，洗脱液回收溶剂至 干，即得龙血竭提取物，其中所述的大孔吸附树脂选自弱极性或中等极性的大孔 吸附树脂。

10.权利要求1至3中任一权利要求所述的龙血竭提取物或者权利要求4或 5所述的药物组合物作为神经细胞保护剂的应用。

11.一种权利要求1至3中任一权利要求所述龙血竭提取物的测定方法，包 括：

i.龙血竭提取物中总酚含量测定

i.i对照品溶液制备

精密称定对照品龙血素B，置容量瓶中，加入无水乙醇至刻度，摇匀，其中 龙血素B浓度为200.0μg/ml，备用；

精密对照品3-甲氧基白藜芦醇，置容量瓶中，加入无水乙醇至刻度，摇匀， 其中3-甲氧基白藜芦醇浓度为400.0μg/ml，备用；

i.ii龙血素B标准曲线绘制

取龙血素B对照品溶液，龙血素B浓度为200.0μg/ml，不同体积分别加无 水乙醇定容至相同体积；以无水乙醇作空白，在选定波长280nm下测定吸收度； 以吸收度为纵坐标，对照品浓度C，mg/ml，为横坐标，绘制标准曲线；

i.iii 3-甲氧基白藜芦醇标准曲线绘制

取3-甲氧基白藜芦醇对照品溶液，3-甲氧基白藜芦醇浓度为400.0μg/ml，不 同体积分别加无水乙醇定容至相同体积；以无水乙醇作空白，在选定波长305nm 下测定吸收度；以吸收度为纵坐标，对照品浓度C，mg/ml，为横坐标，绘制标 准曲线；

测定法：

取龙血竭提取物半成品，加入无水乙醇溶解；照分光光度法，在280nm和 305nm的波长处分别测定吸光度，分别从标准曲线上读出供试品溶液中龙血素B 和3-甲氧基白藜芦醇的含量，计算，参见2005版中国药典3部附录II A紫外- 可见分光光度法，即得；

ii.龙血竭提取物中白藜芦醇、3-甲氧基白藜芦醇和龙血素A、B和紫檀芪含量 测定

ii.i对照品溶液制备：

精密称取白藜芦醇对照品、3-甲氧基白藜芦醇对照品、龙血素A对照品、龙 血素B对照品、紫檀芪对照品，加无水乙醇溶解；

ii.ii线性范围考察

分别精密量取对照品溶液0.75、1.5、3.0、4.5、6.0、7.5、9.0ml于25ml容 量瓶中，用无水乙醇超声溶解，定容；吸取10μL对照品溶液注入高效液相色谱 仪，记录色谱图，计算峰面积值；以峰面积值为纵坐标，进样量为横坐标作图；

色谱条件：色谱条件与系统适应性试验

固定相：SHIMADZU十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，4mm×250mm；5μm， 冰醋酸溶液1→90、乙腈为流动相，双波长检测，检测波长分别为280nm和305nm， 流速1ml/min；

ii.iii供试品溶液制备

取过三号筛的龙血竭提取物粉末，精密称定，置容量瓶中，加入无水乙醇， 密塞，超声处理，放冷，用无水乙醇定容到刻度，摇匀，用0.45μm微孔滤膜滤 过，作为供试品溶液；

ii.iv测定法

精密吸取供试品溶液10μl，注入HPLC检测，即得。