[发明专利]可以高效率地检索5-羟色胺6受体配体的可稳定表达HA-5-HT6R的细胞系

说明书

【技术领域】

本发明涉及一种5-羟色胺6受体(5-HT6R)配体高效率检索方法。 

【背景技术】

5-羟色胺受体(5-HTR)包括5-HT₁R到5-HT₇R的各种亚型，目前为止被发现的种类共有15种，被认为与抑郁症、精神分裂症、焦虑症(anxiety)及睡眠障碍等精神疾病及阿尔茨海默病等有关。 

其中，5-HT₆R是最近探索出盐基序列的5-HTR，虽然还没有研究出其机制，但被认为涉及到退化性脑疾病与精神疾病之类的疾病。根据最近的研究报告显示，5-HT₆R的刺激在生物化学及行动学方面可以呈现出类似于抗抑郁剂的效果，而且各种报告均指出脑发育(brain development)、记忆和学习(learning and memory)及老年痴呆症(Alzheimer disease)等很多重大脑部疾病都与其有密切关系(Grimaldi B et al.，NaunynSchmiedebergs Arch Pharmacol.357(4)：393-400，1999；Garcia-AllozaM et al.，Neuropsychopharmacology 29(2)：410-416，2004；Lorke D etal，，BMC Neurosci.27；7-36，2006；Greengard et al.，J Neurosci.27(15)：4201-4209，2007)。以5-HTR作为作用点的药物包括非选择性地结合于一切5-HTR的氯氮平(clozapine)，选择性地结合于5-HT₆R的药物为SB258585，但还无法作为疾病的治疗剂使用。在研究抑郁症或阿尔茨海默病等疾病时，由于人们对于5-HT₆R在脑细胞的具体功能及5-HT₆R参与的信号传达机制几乎没有任何认识，为了研究其功能与机制并选择性地开发配体，需要具备可以选择性地研究5-HT₆R的系统。 

本发明人们制作出可以表达出HA(Hemagglutinin)被连接到N端(N-terminal)的5-HT₆R的细胞系，上述HA-5-HT6R暴露于细胞表面外部，可以稳定表达上述HA-5-HT6R并维持上述5-HT₆R的活性，确认了上述细胞系可以在5-HT₆R的选择性配体的开发过程中进行高效率检索。

【发明内容】

【发明需要解决的技术问题】 

本发明的目的是提供一种可以稳定表达5-HT₆R的细胞系。 

本发明的另一个目的是提供一种基于上述细胞系的5-HT₆R配体高效率检索方法。 

本发明的再一个目的是提供一种包含上述细胞系的5-HT6R配体高效率检索用组成物。 

【解决问题的技术方案】 

为了实现上述目的，本发明提供一种含有N端连接HA(Hemagglutinin)的5-HT₆R基因构建体的载体(vector)被转导到宿主细胞而稳定表达HA-5-HT6R的细胞系。 

本发明提供的5-HT₆R配体高效率检索方法包括下列步骤：步骤1，利用受检化合物处理本发明稳定表达HA-5-HT6R的细胞系； 

步骤2，检查上述经过处理的细胞系的5-HT6R活性；及 

步骤3，和未经过处理的细胞系进行比较，筛选出可以在上述细胞系中增加或减少5-HT6R活性的受检化合物。 

本发明提供的5-HT₆R配体高效率检索方法包括下列步骤：步骤1，利用受检化合物处理本发明稳定表达HA-5-HT6R的细胞系； 

步骤2，精制上述经过处理的细胞系的蛋白质； 

步骤3，测定上述经过精制的蛋白质的5-HT6R活性；及 

步骤4，和未经过处理的细胞系进行比较，筛选出可以在上述细胞系中增加或减少5-HT6R活性的受检化合物。 

本发明还提供包含本发明稳定表达HA-5-HT6R的细胞系的5-HT6R配体高效率检索用组成物。 

下面说明本发明所使用的术语。 

术语“5-HT₆R配体”表示结合在5-HT₆R而调节活性的物质。 

下面详细说明本发明。