[发明专利]一种在果实中特异表达白藜芦醇的植物表达载体

说明书

[技术领域]

本发明涉及利用香蕉果实特异表达Banlec基因启动子携带葡萄芪合酶基因构建植物表达载体。

[背景技术]

香蕉(Musa spp.)属芭蕉科(Musaceae)芭蕉属(Musa)。所有的食用香蕉即为芭蕉属的栽培种，是重要的热带、亚热带水果。香蕉肉质甜糯，芳香味美，且营养价值高。除鲜食、煮食外，还可加工成各种各样营养丰富的产品。香蕉是利用转基因方法生产重组药用蛋白和肽，或者是有价值的化合物的理想植物，其作为生物反应器的优点主要有以下几个方面：1、它的生长期短，十至十二个月就可收获；2、香蕉是鲜食水果消耗量最大的水果，鲜食性可以保证水果中的基因表达的药用蛋白不至于变性，是发展中国家儿童口服疫苗的理想载体(Richter L，Mason HS，Artzen CJ(1996).Transgenic plants createdfor oral immunization against diarrheal diseases.J Travel Med3：52-56.)。3、产业化程度高。目前香蕉的种植和生产已经达到相当规模，从组培种苗的生产、繁殖、到种植、果园管理、果实采后的加工处理和储藏运输，形成了较为成熟的生产和营销体系，一但有了新的品种，将很快实现产业化。正是基于这种目的，近年来有关香蕉采后成熟相关基因克隆和表达研究逐步深入，试图寻找果实特异表达基因及其启动子，进一步发展和完善香蕉作为生物反应器的研究。

香蕉凝集素(Banana lectin，BanLec)是在成熟香蕉果实中的一种主要蛋白，我们在海南省自然科学基金项目和国家自然科学基金项目资助下，通过染色体步移法克隆到一段BanLec基因5’端非翻译区700bp的序列，NCBI同源性比较为一新的核酸序列。通过Promoterpredictions等软件进行基础启动子的分析，结果表明在89—138bp，221—270bp和499—548bp存在三处可能的基础启动子区。该启动子具有高等植物启动子应具有的调控元件，如TATA盒、CAAT盒、转录起始位点及其他调控元件。用该启动子序列置换植物表达载体PBI121上的35S启动子构建成一个新的植物表达载体PBIL2，通过对PBI121和PBIL2上GUS瞬时表达的染色及活性测定，结果以香蕉幼叶、根和果实为受体材料，基因抢轰击后，受体材料培养16h，pBIL2包被的微弹轰击的材料，叶片、根在显微镜下没有观察到蓝色，而果实薄片在果肉中观察到蓝色。pBI121包被的微弹轰击的材料，叶片、根和果实薄片在显微镜下均观察到蓝色。水包被的微弹轰击的材料，叶片、根和果实薄片在显微镜下均未观察到蓝色。这些结果说明，pBI121上的35S启动子是组成型启动子，而BanLec基因的启动子片段是果实特异表达的启动子。Gus基因瞬时表达结果说明，我们所获得的凝集素基因启动子，只在香蕉果肉中瞬时表达，果皮中没有看到蓝色，这与我们以前对凝集素基因做的定量表达相一致。研究结果已获国家发明专利授权(专利号：ZL200410092468.4)。