[发明专利]一种9-蒽酮螺环内酯类化合物及其制备方法和用途

说明书

技术领域：

本发明涉及用灰绿曲霉HB1-19(Aspergillus glaucus HB1-19)(保藏编号是：CCTCC M 206022)生产9-蒽酮螺环内酯类化合物的方法；本发明还涉及该类化合物在制备细胞增殖抑 制剂或抗肿瘤剂中的用途。

背景技术：

本发明人曾经从灰绿曲霉HB1-19(Aspergillus glaucus HB1-19)(保藏编号是：CCTCC M 206022)液体发酵产物中发现具有明显抗肿瘤活性的9-蒽酮内酯类化合物灰绿霉素A，在进 一步对灰绿曲霉HB1-19(Aspergillus glaucus HB1-19)发酵条件进行优化的过程中，获得具 有新颖螺环结构的9-蒽酮螺环内酯类化合物。研究发现所示9-蒽酮螺环内酯类化合物具有 细胞增殖抑制活性，目前尚未见对该化合物的化学结构及细胞增殖抑制活性的报道，因此 市场上也尚未见有与此有关的药物。

发明内容：

本发明旨在提供一种结构独特的具有抑制肿瘤细胞增殖作用，具有抗肿瘤活性的新化 合物。其结构式

式I   

其结构特征是：含螺环和不饱和内酯环的9-蒽酮螺环内酯，其中R-R₅为氢、氨基、 羟基、烷氧基、酰氧基或酰氨基。

本发明优选的式I化合物其中R-R₄为羟基、R₅为氢。

本发明的式I化合物可通过微生物发酵培养来获取含有9-蒽酮螺环内酯类化合物的发 酵物，然后从发酵物中采用硅胶柱层析、制备HPLC等方法分离纯化得到。

本发明的下述实施例中列举了利用灰绿曲霉HB1-19(Aspergillus glaucus HB1-19)(保藏 编号是：CCTCC M 206022)制备本发明式I化合物的实例。

具体实施方式：

在如下的实施例中所指的化合物I的化学结构：

  化合物I

实施例1 化合物I的发酵生产及分离精制

1 发酵生产

生产菌的发酵培养：按培养微生物的常规方法，取灰绿曲霉HB1-19(Aspergillus glaucus HB1-19)(保藏编号是：CCTCC M 206022)适量，接种到固体斜面培养基[将普通的 PDA培养基中的淡水换成人工海水，将土豆汁换成50g/L甘薯粉，其他成份不变]上，在 28摄氏度培养箱中培养4天。

用无菌水从灰绿曲霉孢子斜面上洗下孢子，制成孢子悬浮液，用血球计数板计数后， 每50ml种子培养基[人工海水、麦芽糖2％、甘露醇2％、葡萄糖1％、味精1％、酵母膏 0.6％、MgSO₄ 0.03％、KH₂PO₄ 0.05％]接种孢子数为10×10⁷个，28℃，175rpm，摇床培 养约40h，作为发酵种子。将发酵种子按14％～16％接种量接入装有50ml培养基[人工海 水、可溶性淀粉4％、蔗糖4％、麦芽糖3％、蛋白胨0.2％、酵母膏0.1％、黄豆粉0.05％、 味精0.2％、MgSO₄ 0.03％、KH₂PO₄ 0.05％。可溶性淀粉先用沸水糊化后再加入培养基中] 的250ml发酵摇瓶中，28℃，175rpm，摇床培养7d左右，获得菌丝体和发酵液。

2 浸膏的获得

用棉布将菌丝体和发酵液分离。将菌丝体用丙酮浸提三次，减压浓缩至不含丙酮，所 得水层用等体积乙酸乙酯萃取三次，合并乙酸乙酯萃取液减压浓缩，得粗浸膏。发酵液减 压浓缩为四分之一体积后，用乙酸乙酯萃取三次，合并菌丝体和发酵液的浸膏，共41.0克。

3 化合物的分离精制

浸膏(41.0克)用氯仿-甲醇混合溶剂溶解后，加300克200-300目硅胶(青岛海洋化 工集团公司产品)拌样，减压除去溶剂后，用硅胶柱层析，以石油醚、石油醚-氯仿，氯仿- 甲醇为溶剂进行梯度洗脱，分为7个流份。Fr-6(12.0g，氯仿-甲醇10：1洗脱物)，先后以 氯仿-甲醇(1：1)为溶剂进行LH20柱层析，再经加压硅胶柱层析以石油醚：丙酮(5：5)为 溶剂，最后经半制备反相高效液相色谱(甲醇：3‰TFA水溶液＝70：30)得化合物I(200mg)。