[发明专利]一种DNA释放剂

说明书

技术领域

本项发明属医学生物化学领域，具体涉及一种提取DNA的释放剂。

背景技术

DNA在细胞中总是与各种蛋白质结合在一起的。DNA的分离主要是指将DNA与蛋白质、多糖、脂肪等生物大分子物质分开。在分离DNA时应遵循以下原则：保证DNA分子一级结构的完整性；排除其他分子污染。

目前常用的HBV DNA提取方法有：(1)煮沸发：将50μl～100μl的病毒裂解液与50μl～100μl待测血清振荡混匀，100℃煮沸10min，4～放置30min～60min，高速离心，吸取上清液进行PCR扩增。(2)浓集煮沸法：将100l～200μl的病毒促沉液与50μl～100μl待测血清振荡混匀，高速离心I0min，使病毒颗粒沉淀，弃去上清液，收集沉淀病毒，然后加入病毒裂解液，100℃煮沸10min，高速离心5min～10min，吸取上清液进行PCR扩增。(3)Trizol裂解提取法：将300μl～500μl Trizol裂解液与100l～50μl待测血清充分混匀，加入氯仿混匀后离心使分层，取上层液体与异丙醇混匀使DNA沉淀，用75％的乙醇洗涤1次，65℃烤干10min，加洗脱液溶解，吸取上清液进行PCR扩增。

以上3种方法需经2～5次的离心、3～7次的开盖等开放操作，提取30个标本的DNA约需1～3个小时，需严格的实验要求，不但费时费力，易导致操作过程中的污染、并且导致核酸丢失的因素较多、检测结果重复性较差。

发明内容

本发明的目的就在于克服现有技术存在的上述不足，而提供一种无污染然、操作简单、检测率高的DNA释放剂。

为了实现上述目的，本发明采用如下技术方案，将1μl～10μl的DNA释放剂和1μl～10μl待测血清直接加到PCR扩增管中，轻轻混匀，加10μl～40μl无菌石蜡油，置PCR扩增仪60℃～100℃处理5min～15min，然后在3℃～10℃条件置1min～5min，直接加入PCR扩增液，进入PCR扩增程序。

本发明的有益效果

本发明使HBV DNA完全释放到液相，而且将待测血清中的蛋白等物质封闭沉淀，消除其对PCR扩增的干扰，使血清直接从采血管中进入PCR扩增管，不需离心、不需振荡、只需一个吸头即可完成DNA的提取过程。整个处理过程只需15min左右，不但操作快速、简便，更重要的避免了操作过程中的污染问题，并且检测结果具有良好的重复性，准确反映血清中病毒的含量。

具体实施方式

实施例1

将5μl的DNA释放剂和5μl待测血清直接加到PCR扩增管中，轻轻混匀，加40μl无菌石蜡油，置PCR扩增仪85℃处理10min，然后在6℃条件置2min，直接加入PCR扩增液，进入PCR扩增程序。