[发明专利]虹彩病毒抗原活性多肽及其用途

说明书

技术领域

本发明与免疫学与疾病检测有关。 

背景技术

石斑鱼是现今养殖界公认为亚太地区最重要的经济鱼种，也为台湾水产养殖业带来莫大的经济效益，估计每年产值可高达20～50亿元新台币，全球市场占有率达42％，产量高达12.367公吨，产值及产量均位居世界第一。但是因为鱼苗与稚鱼的养成多为室内密集式的饲养，造成石斑鱼病害感染的情况严重。目前台湾石斑养殖的病毒害以神经坏死病毒(nervousnecrosis virus)和虹彩病毒(iridovirus)为最严重，感染往往造成石斑鱼苗大量死亡，严重威胁台湾养殖产业。 

虹彩病毒为正二十面体，大小约120-300nm的双股DNA病毒，近些年来已被证实会对20种以上的鱼种造成感染，其中石斑种苗的感染率在60％以上。虹彩病毒科主要分成五个病毒属，分别为Iridovirus、Chlorirdovirus、Ranavirus及Lymphocystivirus，以及在2003年被发现一新的病毒属Megalocystivirus。在台湾目前发现有两种病毒属的存在，分别为Ranavirus及Megalocystivirus，两种病毒属皆会造成高的疾病发生率及死亡率。 

目前检测虹彩病毒的方法多以聚合酶链反应为主，但此方法耗时及耗材，且需有实验室设备才能完成，对于目前渔民来说诸多不便且成本较高。因此，若能开发出可携带的快速诊断试片，仅需肉眼观察即可判断是否感染病症，除了可以早期诊断疾病的存在，减少养殖户在购买被感染的鱼苗时的经济损失，基于各国检疫及因应出口贸易竞争的需求，在市场上亦极具产业利用性。

发明内容

本发明的特征在于发现一段新颖的氨基酸序列，其为虹彩病毒的抗原决定区位之一，根据此抗原决定区位制造出来的单株或多株抗体，可进一步应用于各种检测套组及检测方法，包括快速诊断试片，克服传统的细胞培养与病毒分离等繁琐步骤的缺点，可以更快速、更经济的侦测水生动物虹彩病毒的感染。 

因此，本发明的一个实施方案为一来自于虹彩病毒的核衣蛋白且具有抗原活性的多肽，其系由SEQ ID NO：13的氨基酸序列所组成。 

本发明的另一实施方案为一组合物，其包含如上述的多肽。 

本发明的另一实施方案为一种以上述组合物所制造的抗体，以及制造抗体的方法。 

本发明的其它实施方案为一种检测虹彩病毒感染的方法，其系使用如上述的抗体。 

本发明的又一实施方案为一种检测虹彩病毒的套组，其包含： 

(1)一支持固相； 

(2)如权利要求第5项所述的抗体，其系附着于前述支持固相上； 

(3)讯号产生工具，其中该讯号产生工具能操作性地与虹彩病毒或其蛋白质片段结合，并与前述(2)的抗体结合而产生讯号； 

(4)相关试剂及清洁剂。 

本发明的其它实施方案为一种组合物，其包含如上述的抗体。 

本发明的又另其它实施方案为一种治疗或预防虹彩病毒感染的医药组合物，其系包含如上述的抗体与医学上可接受的载体。 

本发明的另一实施方案为一饲料添加剂，其系包含如上述的抗体。 

附图简述 

前文的所述以及实施方式可藉由附图达到更好的说明效果。为了加强本发明的说明，将适当的实施例的图式列举于此。要注意的是，本发明并不受限于列举于此的说明。 

图1为使用本发明的单株抗体进行间接免疫荧光测试的结果，左上、 右上与左下分别为3株不同实验室编号的单株抗体，标号分别为M1、M2、M3，右下C-为阴性控制组。 

图2为使用本发明的单株抗体进行西方墨点转渍法测试的结果，图2A、2B与2C分别为250倍、2000倍及5000倍稀释的抗体的结果。M表示为标准蛋白质分子量标志(KDa)，道1与道2的样本皆为虹彩病毒颗粒，道3的样本为老鼠组织，道4的样本为石斑鱼检体。 

图3为使用本发明的单株抗体进行免疫墨点法的结果。实线黑框内的六十孔为60株基因型别属于Ranavirus病毒属，虚线黑框内的二十孔为20株基因型别属于Megalocytivirus病毒属。长短虚线框内，C+栏为基因型Ranavirus的病毒，第一格为力价为10^5.8TCID₅₀/ml的病毒，往下进行5次10倍连续稀释，C-为阴性的石斑鱼检体当控制组。