[发明专利]一种内包裹免疫毒素外连接抗体的聚乳酸-羟基乙酸共聚物纳米颗粒

说明书

技术领域：

本发明属于生物医药领域，更具体地，本发明公开了一种内包裹毒素外连 接抗体的聚乳酸-羟基乙酸共聚物(PLGA)纳米颗粒、其制备方法及用途。

背景技术：

免疫毒素是由抗体或抗体片段和蛋白毒素(如绿脓杆菌外毒素PE)进行化学 交联或基因融合而形成的复合物。目前，PE构建的免疫毒素是把除去细胞结合 部分的PE和抗体片段进行基因融合而形成的。尽管PE构建的免疫毒素在肿瘤 的临床治疗中取得了令人瞩目的成就，然而，其临床应用仍然受限于免疫毒素 的严重的非特异毒性，这些非特异毒性主要表现为肝毒性一由于免疫毒素和正 常组织非特异性结合造成的一种非特异毒性，PE构建的免疫毒素中的毒素部分 在非特异毒性中起着重要的作用。最近人们发现，一些方法(如降低免疫毒素 的等电点)可以用作来降低免疫毒素的非特异毒性。此外，针对PE构建的免疫 毒素中的毒素部分的免疫反应是治疗固体肿瘤的主要障碍，克服免疫毒素的免 疫原性的方法一般为联合使用免疫抑制剂(CTLA4Ig或Rituximab)。如果能减 小免疫毒素的免疫原性和非特异毒性，我们便可以加大免疫毒素的临床使用剂 量，从而得到更好的临床效果。但是，除了聚乙二醇修饰免疫毒素以外，目前 很少有同时可以解决这两个问题的方法。

发明内容：

本发明的发明人经过大量实验，将通常应用于包裹小分子药物、减少这些 药物毒副作用的聚乳酸羟基乙酸共聚物(PLGA)来包裹PE毒素，这里优选 PE38KDEL的I型突变体：PE38KDEL I，为了增加其靶向性，本发明的发明人在 包裹了PE38KDEL I的聚乳酸-羟基乙酸共聚物(PLGA)表面通过碳化二亚胺技 术连接人源化SM5-1单克隆抗体的Fab’片段，得到了一种内包裹PE38KDEL I 型突变体，外连接人源化SM5-1抗体的聚乳酸-羟基乙酸共聚物纳米颗粒。

本发明的发明人利用本发明得到的内包裹PE38KDEL I型突变体外连接人源 化SM5-1抗体Fab’片段的聚乳酸-羟基乙酸共聚物纳米颗粒(以下简称 PE-NP-S)进行了一系列的实验，实验结果表明PE-NP-S显示出更好的抗肿瘤活 性，而且具有更小的非特异毒性和免疫原性，对抗PE中和性抗体的敏感度更低， 达到了本发明的目的。

本发明的发明人还公开了制备上述纳米颗粒的方法，包括首先制备包裹免 疫毒素的纳米颗粒，然后在纳米颗粒表面连接抗体两个步骤。

类似地，利用本发明公开的方法，还可以连接其它完整抗体或其它人源化 抗体片段(例如Fab’片段或F(ab’)₂)得到外部连接上述抗体或片段的包裹了 PE38KDEL I型突变体的聚乳酸-羟基乙酸共聚物纳米颗粒，这些完整抗体或人源 化抗体片段可为被肿瘤细胞内吞的抗体或其片段，如重组人源化抗HER2单克隆 抗体(rhuMAbHER2)和重组人源化抗CD22单克隆抗体。

相应地，利用本发明公开的方法，还可以利用聚乳酸-羟基乙酸共聚物包裹 其他类型的毒素然后再在其外部连接上述的抗体或抗体片段得到各种纳米颗 粒，这些毒素可以为篦麻毒素和白喉毒素之一。

本发明公开的纳米颗粒可以和其它药学上可接受的辅料一起组成药物制 剂。这些药物制剂可以用于治疗肿瘤。肿瘤可以是SM5-1结合蛋白抗原表达阳 性的肿瘤，或者是HER2、CD22表达阳性的肿瘤。

所述的治疗SM5-1结合蛋白抗原表达阳性的肿瘤药物，包括但不限于缓解或 /和减轻SM5-1结合蛋白抗原表达阳性的肿瘤的各种症状的药物。这里所述的 SM5-1结合蛋白抗原表达阳性的肿瘤包括肝癌、乳腺癌及黑色素瘤等，

优选肝癌。

更具体地，本发明公开了：

1.一种内包裹免疫毒素外连接抗体的聚乳酸-羟基乙酸共聚物纳米颗粒。

2.如1所述的纳米颗粒，其中免疫毒素为篦麻毒素、白喉毒素、PE38KDEL I型突变体之一，抗体为人源化抗体或人源化抗体的Fab’片段。

3.如2所述的纳米颗粒为内包裹PE38KDEL I型突变体外连接人源化SM5-1 抗体Fab’片段的聚乳酸-羟基乙酸共聚物纳米颗粒。

4.如3所述的纳米颗粒，其粒径为70～140nm，包裹效率为35～45％， 抗体连接效率为15～25μg/mg纳米颗粒。