[发明专利]黄疣海参中新的抗肿瘤化合物Hillaside A

说明书

技术领域

本发明涉及医药技术领域，是一种从海洋动物黄疣海参中分离到的新的抗肿瘤化合物Hillaside A。

背景技术

黄疣海参(Holothuria hilla Lesson)属棘皮动物门海参纲楯手目海参科动物。中等大，体长一般为200mm，宽约40mm。广泛分布于我国的台湾，广西涠洲岛，海南岛和西沙群岛，资源较为丰富。其体内含有丰富的蛋白质、多糖、维生素、皂苷类物质，具有补肝肾，益精，养血的功效。有关其所含的皂苷类成分的化学结构及抗肿瘤活性迄今尚未见有过报道。

发明内容

本发明是从生长于中国福建海域的黄疣海参中提取分离一种新的皂苷类化合物，命名为HillasideA，其化学结构如下：

Hillaside A为无色结晶性粉末，熔点211～212℃(MeOH-H₂O)，-21.0°(c＝0.5，MeOH)。Liebermann-Burchard反应和Molish反应均呈阳性。电喷雾质谱信号m/z623[M+Na]⁺和m/z 599[M-H]^-。红外光谱：max-3478，强宽峰(羟基)，1751(羰基)，1637(双键)。¹H-和¹³C核磁共振数据见表1。

表1  HillasideA的的¹H和¹³C核磁共振数据

Xyl：木糖，J值：偶合常数

本发明还提供了从黄疣海参提取分离Hillaside A的方法，其步骤如下：

(1)提取：将黄疣海参洗净，切碎，用5倍量(重量)95％乙醇浸泡7天，滤出提取液，再用85％乙醇浸泡提取2次，每次7天，合并3次提取液，减压回收乙醇，得流浸膏。将流浸膏溶于水中，通过大孔树脂柱，依次用水和50％乙醇洗脱。收集50％乙醇洗脱液，减压回收乙醇，得总皂苷提取物。

(2)分离：将上述总皂苷提取物应用硅胶柱层析，以二氯甲烷∶甲醇∶水为8～5∶1～4∶1混合溶剂和正丁醇∶甲醇为20∶1两相溶剂洗脱，薄层层析检测，收集含Hillaside A的流份，再经Zorbax SBC18高效液相柱层析，以甲醇∶水为45∶55为流动相洗脱，得HillasideA纯品。

本发明对黄疣海参皂苷HillasideA进行了体外抗肿瘤试验，表明其具有明显的抑制肿瘤的效果。试验所用细胞株为国际通用的肿瘤细胞株，即：

A-549(肺癌)

MCF-7(乳腺癌)

IA-9(卵巢癌)

CAKI-1(肾癌)

PC-3(前列腺癌)

KB(鼻咽癌)

SK-MEL-2(黑色素瘤)

HCT-8(肠癌)

试验方法为国际通用的SRB法：根据细胞生长速率，将处于对数生长期的肿瘤细胞以90μl/孔接种于96孔培养板，贴壁生长24小时再加药10μl/孔。每个浓度设三复孔。并设相应浓度的生理盐水溶媒对照及无细胞调零孔。肿瘤细胞在37℃、5％CO₂条件下培养72小时，然后倾去培养液，用10％冷TCA固定细胞，4℃放置1小时后用蒸馏水洗涤5次，空气干燥。最后加入150μl/孔的Tris溶液，酶标仪520nm波长下测定OD值。试验结果见表2。

表2  Hillaside A对肿瘤细胞的抑制作用

IC₅₀：表示本发明化合物的半数有效抑制浓度

上述实验结果表明，HillasideA对以上8种肿瘤细胞株均显示明显的抑制作用。

本发明为研制新的抗肿瘤药物提供了新的先导化合物，为开发利用中国的海洋药用生物资源具有重要意义。

具体实施方式：

以下结合实施例进一步描述Hillaside A的分离制备。

将黄疣海参3500克洗净，切碎，分别用5倍量(重量)的95％、85％、85％乙醇依次浸泡，每次浸泡7天，合并乙醇浸出液，减压回收乙醇，得流浸膏。将流浸膏溶于3倍量水中，过滤，滤液通过DA201-B大孔树脂柱，依次用水和50％乙醇洗脱，收集50％乙醇洗脱液，减压回收乙醇至干，得总皂苷72.2克。将总皂苷进行硅胶柱层析，以二氯甲烷∶甲醇∶水为7.3∶2.7∶1的溶剂洗脱，收集含Hillaside A的流份。再经Zorbax SBC18高效液相柱层析，以甲醇∶水为45∶55为流动相洗脱，得Hillaside A纯品54毫克。