[发明专利]一种鉴定全叶延胡索的方法

说明书

技术领域

本发明属于利用分子生物学方法鉴定全叶延胡索的技术领域，具体地说， 是涉及一种鉴定全叶延胡索的核苷酸序列、核酸分子探针和方法。

技术背景

元胡是著名中药“浙八味”中的一味，目前一般元胡正品指延胡索 (Corydalis yanhusuo)，此外同属的一些其它植物在一些地区亦代替元胡入药， 但价格和药效均与元胡有较大差别。其中全叶延胡索为最常见的代替品和原材 料市场上的混淆品。目前，中药材种植上存在品种混乱问题，原材料市场上存 在品质优劣问题。仅仅依靠传统的形态分析已不能进行品种的科学鉴定和种源 的遗传分析。但是还没有一种可靠有效的方法可以将全叶延胡索与延胡索区分 开来，解决药材道地性问题。

近年来，随着中药现代化步伐的加快，中药的标准化已成为中药产业发展 和打入国际市场的瓶颈。药用植物或植物药的发展离不开标准化生产，即目前 大力推行的GAP(Good agriculturing Practice，中药材生产质量管理规范) 工作的核心。而种(品)质的标准及科学的鉴定方法是质量标准控制和管理的 前提。

迄今为止，国际上有关延胡索植物化学、药用价值等方面的研究已有不少 报导，但是尚未见有关延胡索药材道地性DNA快速鉴定的技术的研究报导。因 此，有必要在DNA分子标记水平采用新方法新技术快速将延胡索的最常见混淆 品全叶延胡索从中鉴定出来，解决中草药种植上品种混乱和原材料市场上品质 优劣等问题。

发明内容

本发明的目的是提供一种鉴定全叶延胡索的核苷酸序列，该序列来源于 ISSR通用引物UBC836扩增所得的全叶延胡索特异性核苷酸序列，具体序列为 SEQ NO 1：

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ttttctccactttac。核酸分子探针和方法

本发明的另一个目的是提供全叶延胡索专一性核酸分子探针，该核酸分子 探针来源于所述的SEQ NO 1核苷酸序列中的1段或2段23或20个核苷酸的 长的寡核苷酸序列或它们的互补序列；或者是上述这些序列经修饰、变化，且 其核苷酸变化量不超过10％的序列。

核酸分子探针的核苷酸序列为：

Repens31：5’-gcatcagtttagattgtttagcg-3’或

Repens32：5’-tatgggtgtagggcctctga-3’或者为Repens31和Repens32。

本发明的再一个目的是鉴定全叶延胡索的方法，是采用PCR方法，以所述 的核酸分子探针为PCR引物，进行PCR反应，其步骤和过程按常规PCR方法进 行。所说的核酸分子探针为Repens31和Repens32。

本发明的有益效果是：

1)样品用量少，仅需少量样品就可以完成整个操作。

2)准确、灵敏度高，Repens31/Repens32为全叶延胡索的专一性分子探针， 若为延胡索，为阴性反应。