[发明专利]中、日白姑鱼种群的鉴定方法

权利要求书

1、一种中、日白姑鱼种的群鉴定方法，其特征是包含以下步骤：

a.取待测白姑鱼样品背部肌肉组织50-100mg，采用酚/氯仿抽提法提取基因组DNA；

b.对所提取的DNA采用三条特异的引物进行PCR扩增；

c.对PCR扩增产物进行琼脂糖凝胶电泳检测，根据凝胶电泳检测结果呈现的亮带带型确定中、日白姑鱼种群。

2、根据权利要求1所述中、日白姑鱼种群的鉴定方法，其特征在于所述步骤a提取待测白姑鱼基因组DNA进一步包括：

(1)将样品放入1.5mL离心管剪碎。加入600μL STE，于振荡器上震荡均匀。加入RNase6μL，终浓度0.04μg/μL，37℃烘箱内孵育1小时；

(2)加蛋白酶K15μL，终浓度0.5μg/μL，颠倒混匀，于50℃烘箱内孵育大于8小时；

(3)烘箱内取出后凉至室温，加600μL平衡酚，温和颠倒混匀至乳浊，离心，小心吸取上清至另一干净离心管；

(4)加等体积苯酚∶氯仿∶异戊醇＝25∶24∶1，颠倒混匀20min，离心，小心吸取上清至另一干净离心管；

(5)加等体积氯仿∶异戊醇＝24∶1，颠倒混匀20min，离心，小心吸取上清至另一干净离心管，加入等体积的预冷异丙醇，颠倒混匀，-20℃存放2小时以上；

(6)离心产生白色沉淀，轻柔倒去异丙醇，再加入800μL 75％的预冷酒精，缓慢颠倒洗涤DNA沉淀，再离心，弃酒精；

(7)重复步骤6；

(8)将DNA样品置于真空干燥器干燥或烘箱干燥，加入100μL双蒸水溶解，置4℃冰箱待用或长期保存于-20℃待用。

3、根据权利要求1所述中、日白姑鱼种群的鉴定方法，其特征在于所述步骤b中采用引物序列如下：

L14734-AAC CAC CGTTGTTATTCAACT

Cytb-CTCAGAATGACATTTGTCCTCA

Cytb-220AGTCACCCGTAGTTGACGTCG。