[发明专利]一种从动物胰脏中提取核糖核酸的方法

说明书

技术领域

本发明属于动物生物制品领域，特别是涉及一种从畜类胰脏中提取核糖核酸的提取方法。

背景技术

核糖核酸(缩写为RNA，即Ribonucleic Acid)，存在于生物细胞以及部分病毒、类病毒中的遗传信息载体。RNA由核糖核苷酸经磷酯键缩合而成长链状分子。一个核糖核苷酸分子由磷酸，核糖和碱基构成。RNA的碱基主要有4种，即A腺嘌呤，G鸟嘌呤，C胞嘧啶，U尿嘧啶。其中，U(尿嘧啶)取代了DNA中的T胸腺嘧啶而成为RNA的特征碱基。与DNA不同，RNA一般为单链长分子，不形成双螺旋结构，但是很多RNA也需要通过碱基配对原则形成一定的二级结构乃至三级结构来行使生物学功能。RNA的碱基配对规则基本和DNA相同，不过除了A-U、G-C配对外，G-U也可以配对。在细胞中，根据结构功能的不同，RNA主要分三类，即tRNA(转运RNA)，rRNA(核糖体RNA)，mRNA(信使RNA)。mRNA是合成蛋白质的模板，内容按照细胞核中的DNA所转录；tRNA是mRNA上碱基序列(即遗传密码子)的识别者和氨基酸的转运者；rRNA是组成核糖体的组分，是蛋白质合成的工作场所。在病毒方面，很多病毒只以RNA作为其唯一的遗传信息载体(有别于细胞生物普遍用双链DNA作载体)。

1982年以来，研究表明，不少RNA，如I、II型内含子，RNase P，HDV，核糖体大亚基RNA等等有催化生化反应过程的活性，即具有酶的活性，这类RNA被称为核酶(ribozyme)。20世纪90年代以来，又发现了RNAi(RNAinterference，RNA干扰)等等现象，证明RNA在基因表达调控中起到重要作用。在RNA病毒中，RNA是遗传物质，植物病毒总是含RNA。近些年在植物中陆续发现一些比病毒还小得多的浸染性致病因子，叫做类病毒。类病毒是不含蛋白质的闭环单链RNA分子，此外，真核细胞中还有两类RNA，即不均一核RNA(hnRNA)和小核RNA(snRNA)。hnRNA是mRNA的前体；snRNA参与hnRNA的剪接(一种加工过程)。自1965年酵母丙氨酸tRNA的碱基序列确定以后，RNA序列测定方法不断得到改进。目前除多种tRNA、5SrRNA、5.8SrRNA等较小的RNA外，尚有一些病毒RNA、mRNA及较大RNA的一级结构测定已完成，如噬菌体MS2RNA含3569个核苷酸。

核糖核酸是动物体内一种生物大分子，可作为免疫触发剂或免疫调节剂。从动物内脏中提取的核糖核酸制成针剂注入体内，可激活机体的T细胞及B细胞的活性，同时可提高人体免疫功能。目前，实验室规模制备高纯度RNA方法已非常成熟，但工业规模制备注射用RNA方法仍有许多有待改进之处。传统RNA制备方法多采用3体积量热酚3次萃取法或氯化钠-柠檬酸钠法制备动物脏器RNA，工艺繁杂，不仅成本高，收率低，而且操作条件极不温和，所用试剂不易回收，易造成环境污染，产品质量不稳定，热原难控制，甚至伤害工作人员。目前从牛脾脏中制备RNA的传统方法往往由于工艺中使用热酚，可能使DNA从组蛋白上解离下来，造成DNA含量超标，同时生产周期过长，生产效率低；收率低。

动物(畜类)胰脏中含有大量的脂肪、蛋白、多糖等物质，从中提取RNA，操作中既要有效破碎完全，又要防止RNA酶对RNA的裂解作用；既要考虑充分去除脂肪、蛋白、糖元等杂质，又要尽量减少有机试剂用量，尽可能回收化学药品减小污染排放、降低生产成本。

发明内容

本发明的目的旨在提供一种从动物胰脏中提取核糖核酸的方法，其特征在于对于胰脏采用破碎、胶体磨研磨、高压均质机破壁、超滤、纯化的提取过程，步骤包括：

1)组织破碎：；

2)胶体磨研磨：将捣碎的牛胰脏浆通过胶体磨制成匀浆，于2-8℃冷藏过夜；

3)高压均质机破壁：弃去冷藏过夜的匀浆的上层泡沫，并用高压均质机以60MPa两次破壁，收集高压均质好的匀浆，然后离心并收集上清液；

4)将上清液进行超滤；

5)纯化：收集超滤后的液体采用酚氯仿抽提法进行纯化，即得提取出的核糖核酸。

在一个具体实施方案中，在实施步骤1之前先清除胰脏的脂肪和血管。

在另一个具体实施方案中，在步骤1中，将脾脏在绞肉机内初绞3遍，然后进行精绞，并将绞碎的牛胰脏与纯化水按1∶0.5的比例放入捣碎缸，按每公斤胰脏加入8克苯甲酸钠，捣碎3分钟，然后按胰脏/蒸馏水(1∶1)再次捣碎2次，每次10秒，以达到混匀状态。

在另一个具体实施方案中，所述的超滤使用截留分子量10000道尔顿以下的中空纤维柱。