[发明专利]一种狗用的转移因子及其制备方法和用途

说明书

技术领域

本发明属于生物工程技术领域中一种用来提高狗免疫力的转移因子，特别涉及一种在狗上应用的转移因子溶液及其制备方法及在狗上的应用。

背景技术

随着人们生活工作节奏的不断加快，人与人之间的交流变得越来越少，因此宠物成了人们理想的精神寄托，并且随着宠物在人们心目中地位的不断提升，一些宠物福利也跟着提高，所以宠物疾病是我们刻不容缓要加强重视的问题。目前狗的一些病毒性疾病已成为困扰人们的一大难题。现有的普遍的解决方法就是打疫苗，然而由于种种原因，有时难免会造成免疫失败，爆发疾病，给诊断和治疗带来一定困难。在免疫失败后往往依赖抗生素治疗，造成了耐药菌株的增加和交叉感染的产生。

转移因子(TF，Transfer Factor)是从淋巴细胞中提取的一类低分子肽与核苷酸复合物，具有传递免疫信息、激发免疫细胞活性、调节免疫功能、增强机体非特异性细胞免疫功能等作用，被誉为T细胞活性的触发剂，细胞免疫的增强剂、细胞免疫调节剂及干扰素产生启动剂。转移因子分子量小、无毒、无抗原性、不起过敏反应，不产生对抗抗体且可超越种系界限应用等优点。自美国著名的免疫学专家Lawrence发现和研究转移因子以来，世界各国不但进行了许多理论研究，而且进行了大量的临床应用研究，使得转移因子成为目前应用广泛的增强免疫制剂。

目前现有的转移因子技术，将去净脂肪和门静脉的动物脾冷冻后一次绞碎，然后加入室温生理盐水进行组织捣碎，装入透析袋内置于盛有室温生理盐水的不锈钢桶内，盖上盖后放入4℃冰箱内透析24小时。这种方法的不足之处是，受透析液腐败因素的制约，透析时间短，透析液中转移因子含量低，仅为每毫升0.4至0.5毫克。

另外，常规采用Laurence方法，即利用两次透析法回收转移因子此法操作简单，但生产周期长工序繁琐(生产周期约需要20天)，耗时长，浪费大量人力物力。因此这些方法都难以进行工业化大规模生产。

因此，需要一种在狗上应用的转移因子溶液及其制备方法及在狗上的应用，以满足目前的宠物狗市场，有效巩固狗打疫苗后的免疫效果。

发明内容

本发明原理基于：Libuid E M等(1972)发现，TF的作用不受种属的限制，即猪的TF能将其免疫活性转移给牛、羊、犬、鸡和人。因此，为使转移因子在宠物中得以广泛应用，同时避免猪、狗、牛等其他动物脾脏成本过高等问题，本发明采用肉鸡脾脏提取转移因子，并对传统转移因子的提取工艺进行比较优化，设计出出产率高、生产成本低且延长透析时间，提高透析液中转移因子的含量的方法。

本发明的第一个目的是提供一种在宠物狗上应用的转移因子溶液的制备方法，步骤包括：

(1)将冷冻的鸡脾脏1kg，去除脂肪、被摸和大的血管，用去热原蒸馏水洗净后切成小块，加入1L无菌生理盐水；

(2)用高压匀制机(100Mpa)进行细胞破碎，混匀后制成匀浆；

(3)置-20℃冷冻和室温融化，反复冻融8次；

(4)然后在4℃，以6000rpm离心并取上清液，反复3次后，将上清置于透析袋中并将透析袋放入盛有无菌生理盐水的容器内，置于0-4℃透析72h；

(5)用4％MaHCO₃调整透析液PH值至中性，并加入0.3％的氯仿作防腐剂；

(6)将透析液通过微孔滤膜进行过滤，然后用超滤膜进行超滤，即为含有转移因子的原液；

(7)在原液中加入稳定剂后，通过0.25μm微孔滤膜除菌过滤，然后加入耐热保护剂，直接分装，即得到转移因子溶液。

在一个具体实施方案中，透析液用无菌过滤，微孔滤膜可用0.45μm，然后用截留分子量为5000道尔顿超滤膜进行超滤，即为原液。

在另一个具体实施方案中，所述的稳定剂是浓度范围为1％-2％的硬脂酸锌2ml，所述的耐热保护剂是5ml甘油。

在一个具体实施方案中，所述的蒸馏水是去热原的蒸馏水。

在另一个具体实施方案中，步骤(2)中同时加入240ml的1％絮凝剂，其中所述的絮凝剂是壳聚糖溶液。

本发明的第二个目的是提供通过上述方法所制备的狗用的转移因子溶液。

由于转移因子是从淋巴细胞中提取的一类低分子肽与核苷酸复合物，目前并没有明确的组分或结构，制备方法的不同，所得的转移因子也会差异，因此通常在生产过程中是通过限定制备方法的参数来明确转移因子。在本发明中，由于限定了具体的制备方法，因此所得到的转移因子具有组分稳定、纯度高、活性好等特点，具有很好的应用前景。