[发明专利]一种从猪脾脏中提取转移因子的方法

说明书

技术领域

本发明属于兽药领域，特别是涉及一种从动物脾脏中提取转移因子的方法。本发明的发明内容主要涉及的是从猪脾脏中提取转移因子的方法。

背景技术

转移因子(transfer factor，TF)是T淋巴细胞释放的一种能够转移致敏信息的物质，它能够特异地将供体的细胞免疫信息转移给受体，从而增强受体的免疫功能。TF自50年代发现至今，国内外学者都对此进行大量研究，并于1979年将其引入到兽医免疫和临床治疗中，目前其在国外已成为一种应用广泛的增强免疫制剂。

由于转移因子无种属特异性，因此临床上转移因子的来源较为广泛，人类临床上常见的有人转移因子、猪转移因子、牛转移因子、羊转移因子、鹅、猴转移因子等。目前畜禽上常见的有牛转移因子、猪转移因子，鸡转移因子。禽畜脾脏为加工过程中的废物，因此有着极广的应用开发前景，已成为转移因子研究的热点。

转移因子为分子量小于10000，具有生物活性的非均一性的小分子混合物，其内含物包括游离氨基酸(16-18种)，核酸、多肽及K、Na、Ca、Mg、Zn等金属元素。各种TF内的理化特性，组成成分差异不大，但含量有较大差异。

从免疫学上，TF可分为特异性转移因子和非特异性转移因子两大类。特异性转移因子系采用某种特定病原感染或免疫人群、动物后再提取含该抗原特异活性的转移因子，目前临床已经应用有乙型肝炎病毒特异转移因子、各种肿瘤特异转移因子、流行性出血热病毒转移因子、布氏菌转移因子、疱疹病毒转移因子、乙型脑炎转移因子、结核菌转移因子等。非特异性转移因子是指用自然人群或动物白细胞提取的具有多种免疫活性的转移因子，可非特异性调节机体的免疫机能，从而提高机体的抵抗力或疫苗的免疫效果。

细胞免疫主要通过T淋巴细胞实现，王建文等报道转移因子能增强罗曼雏公鸡T淋巴细胞的比值，马风龙等研究发现将鸡脾脏转移因子与新城疫I系苗同时给肉鸡注射可显著提高淋巴细胞的转化率，证明鸡脾脏TF对鸡的细胞免疫有促进作用，可促进T淋巴细胞的增殖与成熟，增强机体的细胞免疫应答能力。

早期经典的转移因子机理研究试验就发现转移因子具有传递特异细胞免疫信息的活性，而抗原信息的刺激与动物机体免疫功能的发挥有着直接的联系。已有众多资料证实，转移因子可激活淋巴细胞E受体，增加E玫瑰花结的形成数目。因此免疫信息通过TF转移给受体淋巴细胞，使细胞获得这种免疫信息而产生识别特异性抗原的受体，当有该种抗原存在时，这种特异性识别受体就会与特异性抗原结合而触发受体细胞活化，从增强淋巴细胞的活性而导致其高度分化增殖。

高迎春等研究报道鸡注射TF后，接种减蛋综合症灭活疫苗可以显著提高鸡体的抗体滴度。马风龙等发现鸡TF活疫苗和油乳剂灭活苗在首免和加强免疫时均具有协同作用，能显著提高免疫接种鸡的体液免疫应答能力，产生较高滴度的抗体，并延长抗体高峰期，使之维持较小时间。由于X淋巴细胞在实现体液免疫机能需要T淋巴细胞的辅助，目前普遍认为转移因子对体液免疫的影响主要是通过T淋巴细胞调节机体的免疫机能。

刘润珍等利用犬五联疫苗免疫猪后制备特异性脾脏转移因子，可以显著增强小鼠E玫瑰花环形成率和腹腔巨噬细胞吞噬活性。陈德坤等研究发现，给健康小鼠注射和口服猪脾脏转移因子可增强外周血液中性粒细胞对葡萄球菌的吞噬率和腹腔巨噬细胞对红细胞的吞噬率。因此，转移因子对机体的非特异性免疫机能也有增强作用。

范振青等研究发现，口服和注射TF可阻断由氢化可的松引起的小鼠的白细胞数、淋巴细胞百分率及脾重指数的下降。苗乃法采用环磷酰胺建立的免疫抑制家兔模型进行猪脾转移因子提升白细胞实验，注射后第3d即可见白细胞总数迅速上升，第5d可达最高峰，第8d后趋向正常。由此推测TF作为免疫激活剂进入机体后，可使造血系统在短时间内产生大量的白细胞，同时活化淋巴细胞，增加T辅助细胞产生和释放更多的淋巴因子，促进T淋巴细胞生长和分裂从而发挥抗放射、抗免疫抑制、增强免疫功能的作用。

王建文等报道雏鸡口服0.5-1.0ML转移因子粗制品，7d后与未服用转移因子组相比，增重明显，且口服转移因子组鸡精神活泼，羽毛有光泽。江青艳等在试验中发现，注射脾脏转移因子对粤黄鸡增重有明显的效果。动物机体的正常生长发育一般由T3、T4和GH协同调控而完成。GH主要促进组织生长，T3、T4主要促进器官、组织的分化，而且，GH的促生长作用，需要有适量的T3、T4的存在。本试验中，注射不同浓度的TF鸡组在8周龄时血液T4，GH水平均显著高于对照组，由此推断脾脏转移因子促进粤黄鸡生长发育的内在机制与血液T4、GH水平的升高有关。