[发明专利]微量稀释法和扣除上清液法

说明书

技术领域

本发明涉及医用免疫检验技术，特别是用来克服HOOK效应和省去洗涤的免疫检验技术，二者可分别使用或联合使用。

背景技术

现有的免疫检验方法(比如ELISA)中的一步法，常会遇到HOOK效应，即在检测高浓度标本时，反而呈现假低值或阴性(后带现象)。通常通过稀释待测物或两步法或竞争法来解决，而这些方法存在操作繁琐或线性范围较窄等问题。本发明以一种简便的微量稀释法就可基本克服HOOK效应。大多数免疫检验方法都需要将结合物和未结合物分离，以使结合物的显示不受干扰。一般是通过洗涤来达到此目的，而洗涤是个繁琐又容易造成误差的环节。本发明以一种扣除上清液法就可避免常规洗涤。

发明内容

一.微量稀释法将一尖头物(比如细针或牙签硬毛等)在待测物中点一下，使尖头沾微量待测物；将此尖头(可除去或不除去多余液体)在反应容器(试管或微孔)底壁点一下(或在该容器的试剂中点一下)，加入试剂(容器中已有试剂时省去此步)，混合反应一定时间；将已沾待测物的尖头在容器的试剂中点一下，再混合反应一定时间(可重复此步骤)。即在检测时稀释。可用无吸附无残留反应容器。

二.扣除上清法将上清液和沉集物分离后(可用磁分离或其他分离方式)，将部分或全部上清液(或稀释的上清液)吸入另一相同容器(吸头和容器用硅烷化材料制成，无吸附无残留，或使各吸头或容器中残留量尽量一致)，并联检测(对照值)，再从沉集物的显示值扣除对照值或经过计算的对照值，就可得出沉集物上结合物的显示值。由此省去洗涤。另一方案是将上清液(或稀释的上清液)和沉集物在同一反应容器中分步反应显示，比如，在沉集物集于容器底一侧后，在磁场固定下，用无残留吸头移去部分或全部上清液，将试剂加入该容器，反应一定时间后，测显示值；然后去掉磁场，使沉集物重悬混匀，再反应一定时间后，使沉集物沉集于容器底一侧，测上清液显示值，算出沉集物上结合物的显示值，查出待测物浓度。

方案特点

一.根据文献，在液相中抗原和抗体结合反应可在数秒中内完成。同理，微量稀释法使高浓度待测物稀减到合适浓度后，在数秒内就可完成抗原和抗体结合反应，达到或超过某一上限显示值(无需准确定量)，提示需做进一步定量分析。微量稀释法虽然不能准确加标本，但可用来筛检高浓度标本。用无吸附无残留吸头和容器。

二.将上清液初步分离后测的显示值，减去沉集物中所剩余上清液所产生的显示值，其效果应基本等同于充分洗涤沉集物后测的显示值。全部移去上清液后各容器之间残余上清液量的差别应基本等同于放射免疫法时残余上清液量的差别。也可去掉全部上清液，加入稀洗液，再将稀洗液移入另一容器，并联测定显示值，进一步减少误差。用无吸附无残留的吸头和容器。

三.一种硅烷化的微孔条板可用作无吸附无残留容器。

具体实施方式

用微量加样排针(在一排用松紧带相连的小块上各附一根细针或牙签等尖头物，各针间距可伸缩改变)批量加样。拉开微量加样排针，使针距加大，针头插入各试管的标本中点一下，松开排针使针距缩小，将沾有标本的针对准插入各反应容器(试管或微孔)在容器底壁点一下，加试剂混合反应；又将沾有标本的排针插入各反应容器的试剂中点一下，混合反应；然后加入足量标本，混合反应，继续进行余步骤。

经磁吸(或其他分离方式)分离后，将容器(沉集孔)中部分或全部上清液移入另一空白容器(对照孔)中，并联加入试剂反应、检测沉集孔和对照孔显示值，再从沉集孔显示值扣除对照孔显示值(或经过计算的值)，就可得出沉集物中结合物的显示值，查出待测物含量。