[发明专利]一种分离严格厌氧产甲烷古菌的方法

权利要求书

1.一种分离严格厌氧产甲烷古菌的方法，其特征在于：

1)将被分离样品中微生物浓度调节至0.5×10⁷-1.5×10⁷/ml；

2)将上层选择性培养基和下层隔氧培养基于115℃蒸汽灭菌20min；

3)将下层选择性培养基在无菌操作台倒入平皿中，其厚度为0.4-0.7cm，冷却凝固后，将预先调整好微生物浓度的样品取100ul均匀涂布在该培养基上；

4)将上层隔氧培养基冷却到40℃左右，倒入涂有样品的上述平皿中，其厚度为0.6-0.7cm，冷却凝固后倒置于干燥器中；

5)将干燥器密封后通入氮气，充气10min后于37℃恒温箱培养3-5天，可观察到甲烷菌单菌落；

所述隔氧培养基是由水和重量体积为2-3％的琼脂粉构成的无营养基质；

所述选择性培养基组成成份及含量为：NH₄Cl：0.7-1.2g/l，MgCl₂：0.08-0.14g/l，NaCl：17-22g/l，CaCl₂：0.2-0.4g/l，K₂HP0₄：0.3-0.5g/l，KH₂P0₄：0.3-0.5g/l，酵母膏：0.8-1.2g/l，蛋白胨：0.8-1.2g/l，碳源1：甲酸钠：1.7-2.4g/l，碳源2：乙酸钠：1.7-2.4g/l，碳源3：甲醇：1.7-2.4g/l，蒸馏水：1000mL，琼脂：重量体积百分数为2-3％，pH：7.0—7.2，按1L选择性培养基加入微量元素母液1ml；

所述微量元素母液组成为：FeCl₃·4H₂O：2000mg/l；CoCl₂·6H₂O：2000mg/l，MnCl₂·4H₂O：500mg/l，CuCl₂.2H₂O：30mg/l，ZnCl₂：50mg/l，H₃BO₃：50mg/l，Na₂SeO₃·5H₂O：100mg/l，NiCl₂·6H₂O：50mg/l，EDTA：1000mg/l，36％HCl：1ml。