[发明专利]一步检测猪病毒性腹泻疾病病原的试纸条

说明书

一、技术领域：

本发明涉及一种检测猪病毒性传染病病原的器具，特别是涉及一种一步检 测三种猪病毒性腹泻疾病病原中至少一种的试纸条。

二、技术背景：

猪腹泻性疾病是一类严重影响养猪业发展的疾病，其中病毒性腹泻尤其难 以防治。猪流行性腹泻病毒(PEDV，代号P)、猪传染性胃肠炎病毒(TGEV，代 号T)和猪轮状病毒(RV，代号R)是引起猪病毒性腹泻的主要病毒，这三种病毒 引起的猪腹泻性疾病，其临床症状相似，而且往往在同一个猪场混合感染的情 况比较多。因此，为了及时预防和治疗猪病毒性腹泻，需要快速鉴别诊断猪病 毒性腹泻的特异方法，即需要快速检测相关病毒及其特异抗体。目前，实验室 检测这三种病毒的方法有：(1)病毒分离与鉴定，即取新鲜腹泻粪便或肠内容 物，处理成无菌病料，接种适合的细胞系分离培养相应病毒，然后用酶或荧光 标记的抗体或者标准阳性血清鉴定病毒，也可以用免疫电镜方法检查病毒；(2) 取新鲜腹泻粪便或肠内容物，制成涂片或冰冻切片，用荧光抗体检测其中的病 毒抗原；(3)用反转录—聚合酶链式反应(RT-PCR)检测病料中的病毒核酸。 其中，还可用酶联免疫吸附试验(ELISA)中的双抗体夹心法检测粪便中的 TGEV。病毒分离与鉴定、RT-PCR技术，都需要实验室条件和专业人员，操作 过程繁琐，检测费时、费力；ELISA和荧光抗体检测法，分别需要酶标仪和荧光 显微镜，也需要较多的操作步骤和经验；而且，这些方法一次只能检测一种猪 病的病毒抗原。可见，上述方法尽管检测特异或敏感，但操作不够简便与快速， 均不适合基层或现场快速检测或诊断。因此，研究一种简便而快速、一步可以 检测这三种猪病病毒抗原的实时在线检测技术，非常重要而迫切。

三、发明内容：

本发明的目的是为了克服现有技术中检测猪病病原存在的缺点，提供一种 特异性强、敏感性高、简便、快速的一步可以检测三种猪病毒性腹泻疾病病原 中至少一种的免疫试纸条。

要解决上述问题，本发明采用的技术方案是：

本发明提供一种一步检测猪病毒性腹泻疾病病原的试纸条，该试纸条含有 支撑层和吸附层，支撑层为不吸水的薄片层，吸附层附着在支撑层上，吸附层 从测试端依次为样品吸附纤维层、吸附金标抗体纤维层、纤维素膜层和手柄端 的吸水材料层，在纤维素膜层上设有检测印迹和对照印迹；所述吸附金标抗体 纤维层吸附有胶体金标记的抗猪传染性胃肠炎病毒TGEV、抗猪流行性腹泻病毒 PEDV和抗猪轮状病毒RV单克隆抗体中的任一种或任两种或三种，所述检测印 迹用抗TGEV、抗PEDV和抗RV多克隆抗体液中对应的任一种或任两种或三种 印制，对照印迹用羊抗或兔抗小鼠的IgG溶液印制；或者，所述吸附金标抗体 纤维层吸附有胶体金标记的抗TGEV、抗PEDV和抗RV多克隆抗体中的任一种 或任两种或三种，所述检测印迹用抗TGEV、抗PEDV和抗RV单克隆抗体液中 对应的任一种或任两种或三种印制，对照印迹用羊抗或兔抗猪的IgG溶液印制。

所述吸附金标抗体纤维层吸附有胶体金标记的抗TGEV、抗PEDV和抗RV 三种单克隆抗体的混合液，所述检测印迹用抗TGEV、抗PEDV和抗RV的三种 多克隆抗体液印制，对照印迹用羊抗或兔抗小鼠的IgG溶液印制；或者，所述 吸附金标抗体纤维层吸附有胶体金标记的抗TGEV、抗PEDV和抗RV三种多克 隆抗体的混合液，所述检测印迹用抗TGEV、抗PEDV和抗RV的三种单克隆抗 体液印制，对照印迹用羊抗或兔抗猪的IgG溶液印制。

所述检测印迹用抗TGEV、抗PEDV和抗RV的单克隆抗体液印制为用抗 TGEV、抗PEDV和抗RV的单克隆抗体的IgG溶液印制；所述检测印迹用抗 TGEV、抗PEDV和抗RV的多克隆抗体液印制为用抗TGEV、抗PEDV和抗 RV的多克隆抗体的IgG溶液印制。

所述支撑层用不吸水的硬质塑胶片条或硬纸条制成；所述测试端样品吸附 纤维层用玻璃棉、或尼龙纤维、或聚酯纤维制成；所述吸附金标抗体纤维层用 玻璃棉制成。

所述纤维素膜层用硝酸纤维素膜、或纯纤维素膜、或羧化纤维素膜、或聚 偏二氟乙烯PVDF纤维素膜制成。

所述吸水材料层用吸水纸制成。