[发明专利]测定食品中三聚氰胺的二极管阵列检测器高压液相色谱法

说明书

技术领域

本发明涉及一种测定食品中三聚氰胺的二极管阵列检测器高压液相色谱法。

背景技术

三聚氰胺(melamine)又称三氨三嗪，简称三胺，是一种重要的氮杂环有机化工原料，白色无味结晶粉末。这种化学品常被用于生产塑料、胶水和阻燃剂，在部分亚洲国家，它也被用于制造化肥。三聚氰胺是一种禁止用于宠物食品及动物饲料的化学物质，动物食用后可以使动物发生肾衰竭并导致死亡。2007年3月美国FDA因为部分宠物生病甚至死亡而下令回收近100个品牌的宠物食品后，人们才开始高度关注三聚氰胺进入食品供应链的问题。2008年8月，国内上千名婴幼儿因长期饮用三鹿奶粉，而出现肾结石病症，经检测发现奶粉中含有大量的三聚氰胺，调查发现奶户往不合格奶源中添加此化学物质。由于三聚氰胺分子中含有大量氮元素，而普通的全氮测定法测饲料和食品中的蛋白质含量时不能排除这类伪蛋白氮的干扰，因而有向食品中添加这种化工原料的违法行为，以提高产品中蛋白质含量。中国政府近期宣布禁止在食品中添加三聚氰胺。

关于食品尤其是奶粉、鲜奶、酸奶等奶制品中三聚氰胺含量的测定方法，目前没有相关国家标准。

南昌高专学报2007年第6期“食品及饲料中三聚氰胺残留量液相色谱检测方法的研究”一文中，蛋白粉等食品用乙腈溶液提取，纤维素钠等食品原料用甲醇溶液提取。乙腈与甲醇均属易挥发、毒性大的有机试剂，对环境污染严重，对操作人员危害大。奶粉等样品基质复杂，会有干扰物也被萃取到乙腈或甲醇中，会干扰测定。由于三聚氰胺显弱碱性，易发生水解，胺基逐步被羟基取代，生成三聚氰酸二酰胺、三聚氰酸一酰胺和三聚氰酸。液相色谱紫外检测器检测食品尤其奶制品时，该检测器对三聚氰胺的水解产物不易判定，这样计算结果时，三聚氰胺的真实含量就会损失，甚至检不出。

新颁布的农业部标准NY/T1372-2007建立了饲料中三聚氰胺的高效液相色谱测定法和气相色谱质谱联用测定法，以及北京艾杰尔科技有限公司的三聚氰胺的样品前处理和检测方法中，除了液相色谱紫外检测器存在的缺点外，还存在以下不足：样品前处理方法针对的是饲料样品；奶粉等奶制品用该提取液1％(质量百分浓度，下同)三氯乙酸水溶液提取后，以8000r/min离心得不到澄清的离心液，以至影响后续步骤的测定。现有方法中用PCX小柱净化，三聚氰胺的水解产物不能富集到PCX小柱上，这就造成测定结果大量损失。因而日常监测饲料中三聚氰胺时，常常会误认为不含有三聚氰胺。小柱的使用有活化、富集、淋洗、脱附几步，需花费较长的提取时间。

另有液相色谱-质谱联用法(HPLC-MS)和液相色谱-串联质谱法(HPLC-MS/MS)。质谱方法均存在仪器昂贵，操作人员需要专门培训，仪器检测时间长的缺点。例如一台液相串极质谱(HPLC-MS/MS)需260万～280万人民币，一台液相色谱质谱联用仪(HPLC-MS)需150万～200万人民币，一台气相色谱质谱联用仪(GC-MS)需100万人民币左右，这些上百万的昂贵仪器不易普及到县级市质量检测部门及中小型食品制造企业，仪器的维护和开机消耗的试剂器材均价格不菲。气相色谱-质谱检测方法还存在提取过程冗长，需要衍生的缺点，衍生试剂不易买到，且该方法衍生结果不稳定。

发明内容

本发明的目的是提供一种测定食品中三聚氰胺的二极管阵列检测器高压液相色谱法，它能克服现有技术的上述缺点。

一种测定食品中三聚氰胺的二极管阵列检测器高压液相色谱法，其特征在于(1)样品取样，(2)用提取液提取样品中的三聚氰胺，(3)用沉淀剂沉淀样品提取液中的蛋白质，(4)离心分离提取液中的上清液，(5)净化过滤上清液，(6)设定二极管阵列检测器液相色谱仪的仪器方法，(7)对三聚氰胺和它的水解产物的辨认，(8)制备标准曲线得出分析方法的回归方程，(9)用液相色谱仪测定样品提取液中三聚氰胺，(10)计算出样品中的三聚氰胺含量。

本发明使用0.2-0.3％三氯乙酸提取液，三聚氰胺不会大量水解，杂质少，测定干扰小；沉淀蛋白的试剂便宜，且使用量少，沉淀效率高，可减少试剂对操作人员的危害和对环境的污染，可省略或缩短去除样品中脂肪的过程，简化了净化过程，节省了耗材，缩短了提取时间；三聚氰胺和它的水解产物均可检测到，检测过程操作简便快速，仪器试剂便宜易于推广，适合大量样品的测定。

具体实施方式

本发明由下述步骤组成：

1样品取样：取固体样品奶粉5.0g。该奶粉可改为蛋白粉、豆粉、米粉、淀粉或面粉，也可以改用液体样品鲜奶，该鲜奶可改为酸奶、乳饮料或蛋白饮料。