[发明专利]一种丙型肝炎病毒变异检测蛋白芯片、其制备方法及用途

说明书

技术领域

本发明涉及一种肝炎病毒检测蛋白芯片，具体涉及一种丙型肝炎病毒检测的蛋白芯片，还涉及该芯片的医疗用途。 

背景技术

生物芯片技术是90年代中期以来影响最深远的重大科技进展之一，是融微电子学、生物学、物理学、化学、计算机科学为一体的高度交叉的新技术，具有重大的基础研究价值，又具有明显的产业化前景。现在，根据基片上教练固定的识别分子种类的不同，生物芯片已经发展了基因芯片、蛋白芯片、组织芯片等多种类型，其中蛋白芯片是应“后基因组时代”而诞生的一项新技术，并广泛的应用于疾病诊断、药物筛选、给药个性化等多个方面，为整个人类社会带来深刻广泛的变革。 

蛋白芯片是用于蛋白质功能研究及其相互作用分析的生物芯片，采用原位合成、机械点样或共价结合等方法将多肽、蛋白、酶、抗原、抗体固定于基片形成分子点阵。利用生物分子与蛋白芯片的探针分子发生杂交或相互作用，检测和分析蛋白质的一项技术。目前对蛋白芯片反应信号的检测主要有荧光法、酶显色法和胶体金-银显色法。荧光法是蛋白芯片通常采用的信号检测系统，主要利用激光共聚焦扫描仪对杂交信号进行高通量检测和分析，具有自动化程度高、灵敏度高的特点，但需要购买昂贵的芯片扫描仪和专业人员，无法在基层医疗单位推广。酶显色法主要利用标记的辣根酶或者其他生化酶与特定的显色液相互作用，根据芯片矩阵的颜色变化对反应结果进行 分析的过程，但灵敏度和特异性低。胶体金-银显色法主要利用胶体金进行蛋白质标记并通过银进行直接显色，该方法既具有高的灵敏度和特异性，同时又无需增添设备，是可视化芯片的重要模式，具有广泛的应用潜力和前景。 

丙型肝炎病毒(HCV)感染引起的丙型肝炎是一种十分严重的传染性肝脏疾病。目前，我国共有患者3800-4000万，并且随着卖淫、吸毒、不规范输血等社会问题的出现呈增加趋势。丙型肝炎治疗主要是采用干扰素合并利巴韦林为主，并根据病毒的基因型和病毒载量的不同采用不同的剂量及治疗时间，但该治疗方案有效率低且复发率高(Fried MW and Hoofnagle JH.Therapy of hepatitis C，Semin Liver Dis，1995；15：82-91)。主要原因在于上述治疗方案中没有考虑到HCV变异对治疗效果的影响。研究显示：HCV变异的大小与干扰素的治疗效果密切关系，当HCV变异大的患者对干扰素的治疗效果差，而HCV变异小的患者对干扰素治疗的应答比率高，因此对HCV变异的研究，除了可以对IFN的治疗效果进行预测，还可以帮助临床制定更有针对性地个体化治疗方案。 

在HCV变异的研究中，位于病毒第二包膜蛋白N端的第一高变区(HVR1)处于十分重要的地位。研究显示：尽管HVR1仅有27个氨基酸，但其变异占到整个病毒基因组变异的80％以上，常以HVR1序列的变化作为衡量病毒变异的标准；HVR1含有HCV唯一的中和性抗原表位，其抗体能阻止病毒吸附敏感细胞，早期HVR1抗体的出现，有助于疾病的自愈；HVR1的变异的复杂程度与IFN的治疗效果有密切关系等(修冰水，凌世淦。丙型肝炎病毒第一高变区的研究进展，国外医学病毒学分册，2000，7(5)：158-160)。国内外十分重视对HCV病毒变异的检测，目前对HCV变异的检测是建立在逆转录-PCR检测HVR1基因异质性的基础之上，该方法对人员素质、设备要求高，因此，至今国内外对HCV变异的检测仅限于大的科研机构水平，无法进行大规模推广，而发明人此前提出了建立在HVR1抗体异质 性检测基础之上的HCV变异检测技术，利用酶联免疫的方法检测HCV患者体内多靶点HVR1抗体的异质性，从而对HCV的变异情况作出判断(申请号200710002626.6)。但建立在酶联免疫技术上的HCV变异检测技术涉及血清用量大、检测不平行、效率低等缺点。 

蛋白芯片在疾病检测中具有很好的应用前景，我国的第一个蛋白芯片新药证书就是丙型肝炎病毒(HCV)抗体检测芯片，可以在一个反应矩阵中同时检测HCV患者血清中总抗体及核心区、非结构区NS3、NS4、NS5共5种抗体的存在性，具有高效、平行、高灵敏度检测的效果。但该产品在我国并没有得到广泛的应用，其中需要购置昂贵的激光共聚焦扫描仪和缺少明确的临床意义是限制其推广的主要原因。目前尚未有检测丙型肝炎病毒的可视化蛋白芯片的报道。 

发明内容

为了解决目前丙型肝炎病毒检测蛋白芯片的缺点，本发明提供了一种丙型肝炎病毒变异检测蛋白芯片。该蛋白芯片固定用抗原为丙型肝炎病毒第一高变区抗原，其氨基酸序列选自如下两种或两种以上的氨基酸序列：