[发明专利]神经毒性寡聚体

说明书

本申请是申请日为2001年6月28日、发明名称为“神经毒性寡 聚体”的中国发明专利申请No.01813312.6的分案申请。

发明领域

本发明涉及治疗或减轻阿尔茨海默氏病和其它与异常蛋白聚集有 关的病症的方法和组合物。具体地说，本发明涉及用于阿尔茨海默氏 病、帕金森病和内障的免疫疗法的方法和组合物。

发明背景

阿尔茨海默氏病(AD)特征性的淀粉样病变主要由淀粉状蛋白β (Aβ)组成(Glenner&Wong，1984)，这是一种在生物液体中发 现的通常可溶的含39-43个氨基酸的蛋白。淀粉状蛋白形成与该疾病 的发病机理相关联，因此鉴定导致Aβ分解代谢受到抑制及其在新皮 质中蓄积的神经化学改变会对AD的发病机理提供重要的线索。

尽管与AD相关的基础病理学、遗传易感性和生物学正变得越来 越清楚，开发预防或治愈该疾病的有效药物的合理的化学和结构基础 仍难以捉摸。尽管AD的遗传学表明Aβ的代谢与该疾病的发病机理密 切相关，如上所述，迄今为止治疗AD的药物集中在“认知增强 剂”，其并不针对潜在的疾病过程。这些药物只获得了有限的成功。

在AD中扰乱的神经化学环境的性质可从淀粉状蛋白Aβ的翻译后 修饰部分地推断出。从生物体系提取的Aβ通常在十二烷基硫酸钠-聚 丙烯酰胺凝胶电泳上作为表观～4kD的单体迁移(SDS-PAGE； (Shoji等，1992))；然而，从AD患者死后脑标本中提取的Aβ在 SDS-PAGE上作为SDS-、尿素-和甲酸-抗性寡聚体迁移(Masters 等，1985；Roher等，1996；Cherny等，1999)。

对这些从神经炎斑和血管淀粉状蛋白提取的SDS-抗性寡聚体进行 的矩阵协助的激光解吸离子化-质谱分析(MALDI-MS)表明存在共价 交联的二聚和三聚Aβ种类(Roher等，1996)。

合成的Aβ_1-40和Aβ_1-42通常在SDS-PAGE上作为表观单体迁移，但 经温育形成更高表观分子量的种类(Burdick等，1992)。该过程通 过暴露于氧化体系而加速(Dyrks等，1992；Atwood等，1997)。

已提出酪氨酸交联作为体内Aβ寡聚反应的一种机制，因为在合成 的人Aβ中的酪氨酸残基可通过过氧化物酶催化的氧化体系而交联 (Galeazzi等，1999)。作为大鼠Aβ，与人Aβ不同，缺乏酪氨酸残 基(Atwood等，1997)，因此它对金属催化的氧化寡聚反应耐受， 而这可能解释了在这些动物中淀粉状蛋白沉积的罕见(Vaughan和 Peters，1991)。

蛋白中的酪氨酸交联是氧化应激的敏感标志。在单一酪氨酰残基 和/或二酪氨酰残基之间形成共价碳-碳桥或碳-氧桥，产生多种稳定 的发荧光的反应产物(Gross和Sizer，1959；Amado等，1984； Jacob等，1996)。游离酪氨酰基团的主要反应产物是强荧光的氨基 酸3，3’-二酪氨酸(DT)、3，3’，3’-三酪氨酸(TT)和pulcherosine (P)，以及无荧光的异二酪氨酸(iso-DT)(Gross和Sizer， 1959；Amado等，1984；Jacob等，1996；Heinecke等，1993)。与 正常脑的相同区域相比，DT和3-硝基酪氨酸水平在AD患者脑的海马 和新皮质区域中升高，并且在AD患者的脑室脑脊液中也升高 (Hensley等，1998)。

酪氨酸交联在其它神经变性疾病如帕金森病和其它α-synuclein fibrils沉积的病症中可能也是重要的。这些疾病和病症包括帕金森 病本身、伴雷维小体形成的痴呆、多系统萎缩、哈-施病和弥漫性雷 维小体病。重组α-synuclein接触硝化剂导致酪氨酸残基的硝化以及 酪氨酸的氧化以形成DT；这导致α-synuclein的交联以形成稳定的 聚集物(Souza等，2000)。同一作者还发现针对硝化的synuclein 产生的单克隆抗体特异性结合在多种synucleinopathies中的雷维小 体和神经胶质细胞内含物(Duda等，关于制备参见Souza等， 2000)。