[发明专利]硅胶膜活化液及其在核酸提取中的应用

说明书

技术领域

本发明属于核酸提取领域的技术，尤其涉及一种硅胶膜活化液及其应用。

背景技术

分子生物学的研究与应用离不开核酸的提取与纯化，核酸提取的效果直接影响着后续的工作和研究，但核酸的提取与纯化一直是耗时繁琐的过程。国内外许多学者一直在探索各种核酸提取纯化的方法。

传统的核酸制备方法常用酚/氯仿等有毒的有机溶剂抽提，这些技术适用范围广，适用于大部分分子生物学研究，但是这些技术操作繁琐且耗时，而且酚和氯仿等有机溶剂易造成环境污染，有损健康。这种方法目前在国内还比较普遍，大部分学校教学经费不是很足的实验室还在使用。

1992年X.delamballerie等开始用Chelex100螯合柱提取细菌及病毒DNA获得较好效果。该方法简单快速，避免使用酚等有害物质，但是提取的DNA纯度较低，不适用于对纯度要求较高的下游的分子生物学实验。

1992年PicardC等利用玻璃粉在高盐下吸附DNA的特性纯化DNA。此后玻璃粉吸附法提纯DNA时有报道，但是该方法操作步骤较多，提取的DNA纯度较低。

1999年R Caldarelli-Stefano等运用磁珠分别从福尔马林固定、石蜡包埋和冰冻组织中提取DNA，整个过程不到两个小时。与传统方法比较，磁珠法是一种可行、简单、敏感和快速的方法。

1997年Adriab R Geksthorpe等利用抗DNA单克隆抗体与磁珠结合的方法从小样本、陈旧样本及含PCR抑制的样本中提取核酸获得很好的效果。但是目前应用此方法生产的商品化DNA试剂盒还没有。

硅胶膜吸附柱法是采用特制的硅胶膜吸附柱来选择性吸附裂解细胞释放的DNA，再经过洗涤和洗脱等简单程序，就可获得高纯度的DNA。但是直接使用硅胶膜方法用于核酸分离存在硅胶膜不稳定、不均一以及与核酸结合能力下降等缺点，用我们特制的活化工艺可以克服以上缺陷。

发明内容

我们采用活化硅胶膜表面基团的工艺使硅胶膜与核酸结合能力得到明显改善，从而达到从生物体的裂解液中分离提取核酸的目的。

直接使用硅胶膜方法用于核酸分离存在硅胶膜不稳定、不均一以及与核酸结合能力下降等缺点，用我们特制的活化工艺可以克服以上缺陷。活化工艺采用化学方法特殊处理，活化液组成为：50-200mM NaHCO₃，1-10％(w/v)SDS，1-50mM EDTA。

本发明的目的是提供一种对硅胶膜进行处理的方法，采用活化工艺可以使其与核酸的结合力得到增加，且使它们的结合力具有良好的均一性与稳定性，提高其生物利用度，更有效地发挥其核酸提取的功能；而且通过该方法使硅胶膜被包裹在活化剂内部，隔绝了与外界环境的接触，因而性质更加稳定，扩大了其应用范围，以满足不同的生产需要。

本发明的硅胶膜活化液，其特征在于，硅胶膜活化液中含有50-200mMNaHCO₃、1-10％SDS和1-50mM EDTA。

根据本发明的硅胶膜活化液，其特征在于，使用该活化液处理后的硅胶膜与核酸的结合能力增强，且活化液使硅胶膜与核酸的结合力具有良好的均一性与稳定性。

根据本发明的的活化液，其特征在于，所述硅胶膜活化液中含有100mMNaHCO₃。

根据本发明的的活化液，其特征在于，所述硅胶膜活化液中含有5％SDS。

根据本发明的的活化液，其特征在于，所述硅胶膜活化液中含有25mM EDTA。

本发明包括利用硅胶膜活化液提取核酸的方法，该方法包括使用活化液活化硅胶膜、裂解细胞、硅胶膜吸附核酸、清除硅胶膜上的杂质以及膜上的核酸洗脱的过程。

根据本发明的方法，其特征在于，所述硅胶膜活化液中含有100mM NaHCO₃。

根据本发明的方法，其特征在于，所述硅胶膜活化液中含有5％SDS。根据权

根据本发明的方法，其特征在于，所述硅胶膜活化液中含有25mM EDTA。

本发明还包括一种对于核酸提取的硅胶膜进行处理的方法，该方法包括切割硅胶膜制备吸附柱、加入硅胶膜活化液至吸附柱以及离心去除活化液的过程。

根据本发明的方法，其特征在于，所述硅胶膜活化液中含有100mM NaHCO₃。

根据本发明的方法，其特征在于，所述硅胶膜活化液中含有5％SDS。

根据本发明的方法，其特征在于，所述硅胶膜活化液中含有25mM EDTA。