[发明专利]多通道食入型过敏原快速检测试剂盒及其制备方法

说明书

技术领域

本发明涉及了一种定性和半定量检测人血清中过敏原特异性抗体IgE含量的多通道食入型过敏原快速检测试剂盒及其制备方法。

背景技术

过敏性疾病是现代社会中最常见的一种疾病，它是由广泛存在的过敏原引发的，我国大约5-10％、美国和欧洲约有5-25％的人受过敏性疾病侵扰，其中幼儿和青少年的病症尤为明显，威胁较严重。过敏反应(allergic reaction)又称变态反应；过敏原(allergen)又称变应原。根据欧洲过敏和临床免疫学学会(European Academy of Allergy and Clinical Immunology，EAACI)发表的观点，免疫介导的过敏反应有两种类型：IgE介导的过敏反应和非IgE介导的过敏反应(Johansson SGO.et al，2001，Allergy，56：813-824)。IgE介导的过敏反应是过敏原刺激抗体的淋巴结、肝、脾等器官的单核吞噬系统，触发浆细胞反应产生特异性IgE(sIgE)抗体。IgE分子的Fc端附着在肥大细胞或嗜碱性粒细胞的IgE受体上，使机体处于致敏状态。当机体再受同类型过敏原刺激时，过敏原使IgE分子交联，引起肥大细胞或嗜碱性粒细胞脱颗粒化，释放出组胺、白三烯及细胞因子等化学物质产生过敏反应、导致机体的毛细血管扩张、水肿、平滑肌痉挛、内分泌活动亢进，引发过敏性疾病的临床症状，如：花粉症、过敏性鼻炎、过敏性哮喘、过敏性休克、荨麻疹、湿疹、血管性水肿、关节炎、头痛、肠胃功能失调及其它慢性症状(周光炎等译，2002，免疫学，PP323-369，人民卫生出版社；Sampson HA，1999，Food allergy，part1，J Allergy Clin Immunol，103：717-728)。

过敏原致敏传递方式分三类：食物型，通过口腔摄入食物过敏原致敏；吸入型，通过鼻腔等吸入花粉、粉尘等环境过敏原致敏；接触型，通过接触皮肤，经毛孔传递引发过敏，如镍、铬制品，橡胶制品等。本试剂盒涉及的过敏原为食物型和吸入型的大分子过敏原蛋白或多肽。

食物过敏原分两大类：植物蛋白和动物蛋白，一般为分子量10kD—70kD的糖蛋白。由它们的结构和功能特性分成为含过敏原的植物蛋白的是豆科植物、树坚果、谷物、水果、蔬菜等中的醇溶蛋白的超家族，花生、树坚果、大豆等的种子贮藏蛋白的杯状蛋白超家族和谷物的α-淀粉酶、蛋白酶抑制剂等植物防卫系统的蛋白家族(Aalberse RC，2000，Structural biology of allergens，J AllergyClin Immunol，106：228-238；Breiteneder H er al，2004，A classification of plantfood allergens，J Allergy Clin Immunol，113：821-830)；含过敏原的动物蛋白的来源为以牛IgE白蛋白为代表的哺乳动物及鸟类的肉、乳蛋白，以小清白蛋白为代表的鱼类肉蛋白，以原肌蛋白为代表的甲壳动物、软体动物、两栖动物和爬行动物等的肉蛋白(Chapman JA et al，2006，Food allergy：a practice parameter，Ann Allergy Asthma Immunol，96：S1-S68)；以它们为原料还产生了数不清的“营养健康食品”(WalJM，1999，Nahrung，43：s168-174)。

IgE介导的过敏反应的致敏过敏原检测在临床上可以通过皮肤试验及各种体外检测方法，如放射性过敏原吸附检测(RAST)、免疫印迹(IS)及酶免疫分析(EIA)等，结合病史、病症的问诊来确定致敏的过敏原。体外检测是测定血液样本中的IgE，特别是过敏原特异性IgE(sIgE)抗体浓度。酶免疫分析中有多种检测结合酶的方法，即荧光法，化学发光法和免疫层析法等，且均有产品被美国FDA批准(Chapman JA et al，2006，Food allergy：a practice parameter，Ann Allergy Asthma Immunol，96：S1-S68)。美国临床实验室标准化委员会(CLSI)专门制定了人IgE抗体免疫分析方法评价的纲要(I/LA20—A，NCCLS，1997，17(20))。使用多通道免疫层析法，仅用少量样品就可以简便、快速地同时检测几种至数十种过敏原，目测可定性判断阳性或阴性结果，使用比色卡可半定量分级，试剂操作方便，既可用于医院床边快速诊断，也可用于社区诊所或乡村医院甚至家庭。尤其适合我国当前的国情。