[发明专利]从畜禽血液中同时分离纤维蛋白原和免疫球蛋白的方法

说明书

技术领域

本发明涉及一种从畜禽血液中同时分离出纤维蛋白原和免疫球蛋白的方法，属于生物活性物质的分离纯化技术领域。

背景技术

近年来，全球以规模化、集约化经营为特点的养殖业飞速发展，大幅度提高了人们生活水平，但是畜禽废弃物(粪便、屠宰下脚料、血液等)的大量排放也给生态环境带来巨大压力。这些废弃物，尤其是血液，含有丰富的蛋白质、多种微量元素、维生素和矿物质，具有很高的营养价值，但是任意排放却造成了严重的环境污染，并可能导致一些疾病的发生。充分而有效地利用畜禽血液资源，不仅能减轻环境污染，而且可以变废为宝，制备出高附加值产品。

我国，每年产生的畜禽血液的量非常大，以我国最大量的畜禽血液猪血为例，我国每年出栏生猪约4亿头，年猪血产量可达100万吨。目前除部分猪血被加工成血粉，作为饲料添加剂及用于生化制药外，大部分没有被利用而自然排放，造成了资源严重浪费和增加了环境处理的压力。猪血中的纤维蛋白原，是构成血液凝块的主要骨架，可以制备纤维蛋白封闭剂，是新一代生物止血材料，用于外科急性止血。猪血中免疫球蛋白含量高达2％，具有抗菌、抗病毒等生物活性和免疫活性，有潜在的医药用途。其它的畜禽血液同样富含纤维蛋白原和免疫球蛋白，开发合适的分离工艺，从畜禽血液中提取多种高附加值的蛋白产品，实现多产物联产，具有良好的应用前景。

血液组分复杂，在体内很稳定，离体后却很快会发生一系列生化变化，如凝血、溶血、氧化等。血液蛋白的分离纯化过程十分复杂，需要一系列有效的生化分离手段。盐析沉淀是蛋白质分离的有效方法，也是从血液中分离纤维蛋白原的主要方法，不过盐析后上清液的盐浓度仍较高，严重影响了后续的分离纯化，直接排放又会造成环境污染。因此，寻找一种有效的耐盐的分离方法是关键。混合模式吸附层析是近年来发展起来的新型层析技术，功能配基同时含有疏水基团和离子交换基团，可以通过静电相吸来强化吸附或静电排斥来协助解吸，配基密度通常比较高，吸附容量大，具有典型的耐盐吸附特性，特别适合于大规模的分离纯化。本发明将混合模式吸附层析与盐析分离相结合，用混合模式吸附剂直接处理盐析沉淀的上清液，充分利用混合模式吸附的高吸附容量、抗体选择行和耐盐吸附的特性，建立起一个同时从禽畜血液中提取纤维蛋白原和免疫球蛋白的经济高效方法。

发明内容

本发明的目的是提供一种从畜禽血液中同时分离纤维蛋白原和免疫球蛋白的方法。

包括如下步骤：

1)制备血浆

配置0.1M的柠檬酸钠溶液作为抗凝剂，将新鲜畜禽血液与抗凝剂按照9：1的比例混合均匀，用离心机以2500～3000rpm转速离心10～20分钟，除去红细胞，得到血浆，置于-20～-40℃冰箱中备用；

2)无机盐沉淀法分离纤维蛋白原

向步骤1)得到的新鲜血浆中加入饱和无机盐溶液，使其饱和度达到16～22％，室温下静置30分钟，待沉淀完全，用离心机以4000～5000rpm转速离心10～20分钟，收集沉淀为纤维蛋白原，得到上清液，为免疫球蛋白粗品溶液；

3)混合模式吸附层析分离免疫球蛋白

调节步骤2)得到的免疫球蛋白粗品溶液的pH至7～8，使其与平衡缓冲液的pH相同，用0.2μm滤膜过滤后，上样到填充有混合模式吸附剂的层析柱中，平衡缓冲液冲洗，洗脱缓冲液洗脱，收集洗脱峰，得到免疫球蛋白溶液；

4)脱盐和干燥

将步骤3)得到的免疫球蛋白溶液脱盐，冷冻干燥，得到免疫球蛋白。

所述的畜禽血液为新鲜的猪血、牛血、鸡血、鸭血或鹅血。无机盐为硫酸铵或硫酸钠。混合模式吸附剂为MEP Hypercel或以4-巯乙基吡啶为功能配基的层析介质。平衡缓冲液为柠檬酸钠缓冲液，pH值为7.0～8.0。洗脱液为柠檬酸钠缓冲液，pH为3.5～4.5。

本发明针对畜禽血液资源的综合利用，将盐析分离与混合模式吸附层析相结合，用于纤维蛋白原和免疫球蛋白的分离纯化。用混合模式吸附剂直接处理盐析沉淀分离纤维蛋白原后的上清液，充分利用混合模式吸附的高吸附容量提高过程的处理量、抗体的高选择性提高分离的效率、耐盐吸附的特性简化分离步骤，得到一个经济高效的提取纤维蛋白原和免疫球蛋白的方法。本发明的优点在于：1)同时提取纤维蛋白原和免疫球蛋白；2)工艺简单，易于放大，成本较低廉；3)过程处理量大，分离效率高；4)所得免疫球蛋白的纯度较高。

附图说明

附图是本发明MEP Hypercel混合模式吸附层析分离猪血浆免疫球蛋白的电泳谱图。

具体实施方式