[发明专利]从禽畜血中提取血红蛋白和超氧化物歧化酶的方法无效
| 申请号: | 200810120961.0 | 申请日: | 2008-09-09 |
| 公开(公告)号: | CN101353370A | 公开(公告)日: | 2009-01-28 |
| 发明(设计)人: | 龚兴国;郦剑勇;叶跃国;曾冬云;秦勇 | 申请(专利权)人: | 浙江大学 |
| 主分类号: | C07K1/14 | 分类号: | C07K1/14;C12N9/08 |
| 代理公司: | 杭州求是专利事务所有限公司 | 代理人: | 韩介梅 |
| 地址: | 310027浙*** | 国省代码: | 浙江;33 |
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| 摘要: | |||
| 搜索关键词: | 禽畜血中 提取 血红蛋白 超氧化物歧化酶 方法 | ||
1.从禽畜血中提取血红蛋白和超氧化物歧化酶的方法,其特征是包括以下步骤:
1)新鲜禽畜血抗凝处理后,离心取血球,加入1倍~5倍体积的水,搅拌混匀后继续搅拌至溶血,得溶血血球;
2)溶血血球加入单价金属盐,至单价金属盐终浓度为0.01M~3M,调节pH至3.0~7.5,不断搅拌,加热到50~75℃,保温30min~180min,过滤,干燥滤渣,得血红蛋白粉,滤液为超氧化物歧化酶粗提液,所说的单价金属盐为氯化钠、氯化钾或两者的混合物;
3)在超氧化物歧化酶粗提液中加入可溶性铜盐,至铜离子终浓度为0.01mM~20mM,加热至55~85℃,保温10~120min后,过滤去渣,超滤,得到超氧化物歧化酶浓缩液,所说的可溶性铜盐是硫酸铜,氯化铜或硝酸铜;
4)调节超氧化物歧化酶浓缩液的pH至4.0~8.5,然后加入浓缩液体积0.5~1.0倍的丙酮,离心取上清液;在上清液中继续加入丙酮,两次加入的丙酮总体积为原浓缩液体积的1.1~2.0倍,离心取沉淀,沉淀即为超氧化物歧化酶粗品;或者将超氧化物歧化酶粗品用水溶解,离心去不溶物,通过阴离子交换剂吸附处理,除去残余杂蛋白,制得超氧化物歧化酶精品;
上述的超滤包括浓缩、脱盐和脱游离铜离子,步骤如下:先超滤膜浓缩;然后不断加水稀释同时超滤膜浓缩脱盐;脱盐后的浓缩液加入EDTA,至EDTA终浓度为0.01~100mM,不断加水稀释同时继续超滤膜浓缩,至透过液无色;上述的超滤膜为截留分子量在1000~30 000之间的超滤膜。
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