[发明专利]一种检测牛免疫球蛋白G的方法及其专用酶联免疫试剂盒

说明书

技术领域

本发明涉及一种检测牛免疫球蛋白G的方法及其专用酶联免疫试剂盒。

背景技术

牛初乳是指乳牛产犊后3天内所分泌的乳汁，是母牛为了供给牛犊在新生环境 下，可以抗外来病毒及细菌而合成的，它富含在体内自然合成的天然抗体。牛初乳 中除了含有丰富的优质蛋白质、维生素和矿物质等营养成分外，还富含免疫蛋白球 (主要为IgG)、生长因子等活性功能组分，能攻击侵入人体的致病原，抑制病菌繁 殖，是一种能增强人体免疫力、促进组织生长的健康功能性食品。

目前多种功能性食品中都添加牛初乳以增强免疫力，但是市面上的产品混杂， 很难辨别其中是否含有牛初乳及其中的牛初乳真正含量是多少。因此，一种能够检 测保健食品中牛初乳含量的方法显得特别重要。目前多是通过检测其中的牛免疫球 蛋白G(IgG)含量高低来确定食品中是否含有真正的牛初乳的。国内外主要采用 琼脂双向或单向免疫扩散法，此外还有免疫电泳法、高压液相色谱法等等。由于上 述方法所用技术难以系统化和标准化、仪器设备复杂和操作繁琐等因素，不适合现 场查验和大量样本筛查。

发明内容

本发明的一个目的是提供一种检测牛免疫球蛋白G的酶联免疫试剂盒。

本发明所提供的检测牛免疫球蛋白G的酶联免疫试剂盒，包括牛免疫球蛋白G 的Fc片段和牛免疫球蛋白G Fc片段的特异性抗体；所述特异性抗体为所述牛免疫 球蛋白G Fc片段的多克隆抗体或单克隆抗体。

其中，所述牛免疫球蛋白G的Fc片段和牛免疫球蛋白G Fc片段的特异性抗体 可以以下述任一种形式存在：

1)所述牛免疫球蛋白G的Fc片段为包被原，所述特异性抗体进行酶标记后作 为酶标记物；

2)所述特异性抗体为包被原，所述牛免疫球蛋白G的Fc片段进行酶标记后作 为酶标记物。

所述试剂盒还可以包括抗抗体；所述抗抗体可以为羊抗鼠抗抗体或羊抗兔抗抗 体；

所述牛免疫球蛋白G的Fc片段和抗抗体可以以下述任一种形式存在：

1)所述牛免疫球蛋白G的Fc片段为包被原，所述抗抗体进行酶标记后作为酶 标记物；

2)所述抗抗体为包被原，所述牛免疫球蛋白G的Fc片段进行酶标记后作为酶 标记物。

其中，所述单克隆抗体具体是由保藏号为CGMCC No.2436的牛IgG高效单克隆 杂交瘤细胞株C-1-4分泌产生的抗体。

所述牛IgG多克隆抗体可为鼠源、马源、羊源、兔源或豚鼠源抗体。

所述试剂盒还可包括牛免疫球蛋白G标准品溶液、显色液、浓缩洗涤液、终止 液、浓缩复溶液；所述终止液为1-2mol/L的硫酸、盐酸溶液或氢氧化钠溶液；所 述浓缩洗涤液为含有0.8-1.2％吐温-20、0.02-0.05％叠氮化钠防腐剂、pH为 6.5-7.4的0.1-0.2mol/L的磷酸盐缓冲液；所述浓缩复溶液为含有0.05-0.2％的 牛血清白蛋白和pH值为5.3-6.0、0.05-0.1mol/L的磷酸盐缓冲液；所述百分含量 为质量百分含量。

所述酶标记中所用的标记酶可为辣根过氧化物酶或碱性磷酸酯酶；当标记酶为 辣根过氧化物酶时，所述显色液由显色液A液和显色液B液组成，显色液A液为过 氧化氢或过氧化脲，显色液B液为邻苯二胺或四甲基联苯胺，终止液为1-2mol/L 硫酸或盐酸溶液；当标记酶为碱性磷酸酯酶时，显色剂为硝基磷酸盐缓冲液，终止 液为1-2mol/L氢氧化钠溶液。

所述浓缩洗涤液为含有1.0％吐温-20、0.05％叠氮化钠防腐剂、pH值为7.4的 0.1mol/L的磷酸盐缓冲液；所述浓缩复溶液为含有0.1％牛血清白蛋白、pH值为5.6 的0.05mol/L磷酸盐缓冲液；所述百分含量为质量百分含量。

所述抗抗体进行酶标记的方法是采用过碘酸钠法将所述标记酶与所述抗抗体 进行偶联得到酶标抗抗体；所述过碘酸钠方法中，所述标记酶与所述抗抗体的摩尔 浓度比为2∶1。

酶标记牛IgG抗原是将牛IgG的Fc片段与标记酶采用戊二醛法或过碘酸钠法偶 联得到的；酶标记特异性抗体是将牛IgG特异性抗体与标记酶通过戊二醛法或过碘 酸钠法偶联得到。

本发明的另一个目的是提供一种检测牛免疫球蛋白G的方法

本发明所提供的检测牛免疫球蛋白G的方法，包括以下步骤：

1)样品前处理