[发明专利]乙肝e抗原磁微粒化学发光免疫测定试剂盒及其制备方法

权利要求书

1、一种乙肝e抗原磁微粒化学发光免疫测定试剂盒，其特征在于，所述试剂盒由：乙肝e抗体包被的磁微粒和生物素标记的乙肝e抗体的混合液、辣根过氧化物酶标记的链亲和素、乙肝e抗原校准品、上述辣根过氧化物酶所作用的化学发光底物液、浓缩洗涤液和反应管组成。

2、如权利要求1所述的试剂盒，其特征在于，所述乙肝e抗体包被的磁微粒与生物素标记的乙肝e抗体的混合比例为1∶1。

3、如权利要求1所述的试剂盒，其特征在于，所述化学发光底物包含A液和B液，其中，

A液包括10mM鲁米诺、0.2mM邻苯三酚、0.05mM 4-碘苯硼酸、0.2M pH8.7硼酸-硼砂缓冲液，其pH值为8.0～10.0；

B液包括3.5mM过氧化脲、0.05％卵清蛋白、0.2M pH7.2磷酸盐缓冲液，其pH值为7.0～7.6。

4、一种制备权利要求1所述试剂盒的方法，其特征在于包括以下步骤：1)配制乙肝e抗体包被磁微粒和生物素标记乙肝e抗体的混合液；2)以辣根过氧化物酶标记链亲和素；3)以基因工程乙肝e抗原配制校准品；4)配制辣根过氧化物酶所作用的化学发光底物液；5)配制浓缩洗涤液；6)分装上述半成品和反应管；以及7)组装为成品试剂盒。

5、如权利要求4所述的方法，其特征在于，在所述配制抗体包被磁微粒和生物素标记抗体的混合液的步骤1)中：

所述的混合液是由乙肝e抗体包被的磁微粒和生物素标记的乙肝e抗体以体积比为1∶1混合，以含20～40％的新生牛血清的磷酸盐缓冲液配制而成；

所述磁微粒为1～10μm粒径、三氧化二铁内核、表面包裹带有氨基或羧基的聚合物，其使用浓度为1～10mg/mL；

6、如权利要求5所述的方法，其特征在于，所述抗体包被磁微粒是通过戊二醛两步法将乙肝e抗体包被于磁微粒上，以含有0.5％～2.0％牛血清白蛋白、pH值为7.2的0.02mol/L磷酸缓冲液为封闭液封闭包被的磁微粒。

7、如权利要求5所述的方法，其特征在于，所述生物素标记乙肝e抗体是通过生物素琥珀酰亚胺酯在微碱性条件下与抗体赖氨酸残基发生偶联反应而实现的。

8、如权利要求7所述的方法，其特征在于，所述活性基团为氨基或羧基。

9、如权利要求4所述的方法，其特征在于，在所述以辣根过氧化物酶标记链亲和素的步骤2)中，采用改良过碘酸钠法以辣根过氧化物酶标记链亲和素。

10、如权利要求4所述的方法，其特征在于，所述化学发光底物液包含A液和B液，其中，

A液包括10mM鲁米诺、0.2mM邻苯三酚、0.05mM 4-碘苯硼酸、0.2M pH8.7硼酸-硼砂缓冲液，其pH值为8.0～10.0；

B液包括3.5mM过氧化脲、0.05％卵清蛋白、0.2M pH7.2磷酸盐缓冲液，其pH值为7.0～7.6。