[发明专利]一种高产纳豆激酶的制作方法

说明书

技术领域

本发明涉及一种高产纳豆激酶的制作方法，属于微生物发酵工程领域。

背景技术

纳豆激酶(Nattakinase，NK)是一种从日本传统食品纳豆中提取的物质，由纳豆芽孢杆菌(Bacillus natto)发酵生产，成本低，安全性好，同时纳豆激酶是一种分子量远远小于尿激酶、链激酶、组织型纤溶酶原激活酶等的蛋白质，并可由肠道吸收，纳豆激酶的体外、体内溶栓性也通过试验得到确定，得出纳豆激酶的体内溶栓活性是纤溶酶plasmin的四倍，在体内作用持续时间长，最重要的一点是它还能激活人体内组织型纤溶酶原激活剂，使之温和、持续地提高血液的纤溶活性，因而纳豆激酶有望开发成为一种新型的口服性溶血栓药物。

纳豆激酶的发酵工艺广泛受到研究者的重视，然而目前采用常规菌种和工艺发酵效价一般只能在2500u/ml以下，效价低，效价影响到纯化回收率，因此，发酵效价对纳豆激酶的生产成本影响很大，提高发酵效价对纳豆激酶向产业化发展具有重要意义。

发明内容

本发明提供一种获得高产纳豆激酶的方法，它包括一个经特殊诱变方法得到的菌种和一种特定的发酵工艺配方，能大幅度提高纳豆激酶发酵效价，使发酵效价在4100u/ml以上，大大降低纳豆激酶的生产成本。

具体实施方式

本发明将纳豆芽孢杆菌BNTN008在含有低聚糖和特定微量元素的培养基中进行发酵，发酵液经离心、超滤、冷冻干燥获得纳豆激酶产品。

实施例1

将纳豆芽孢杆菌BNTN008接种到具下列配比的培养基中：

葡萄糖      2.0％

低聚麦芽糖：0.5％

牛肉膏：    0.5％

酵母膏      2.0％

CaCl₂       0.3％

ZnSO₄.7H₂O：30ppm

MnSO₄：50ppm

pH     7.0

35℃通气发酵48小时，发酵液经离心、超滤、冷冻干燥获得纳豆激酶产品。

实施例2

将纳豆芽孢杆菌BNTN008接种到具下列配比的培养基中：

葡萄糖      1.0％

低聚果糖：  1.5％

牛肉膏：    0.5％

酵母膏      2.0％

CaCl₂       0.3％

ZnSO₄.7H₂O：100ppm

MnSO₄：     10ppm

pH          7.0

35℃通气发酵48小时，发酵液经离心、超滤、冷冻干燥获得纳豆激酶产品。

实施例3

将纳豆芽孢杆菌BNTN008接种到具下列配比的培养基中：

低聚麦芽糖：5.0％

牛肉膏：    0.5％

酵母膏      2.0％

CaCl₂       0.3％

ZnSO₄.7H₂O：300ppm

MnSO₄：     50ppm

pH          7.0

35℃通气发酵48小时，发酵液经离心、超滤、冷冻干燥获得纳豆激酶产品。