[发明专利]葡萄糖测定方法及其测定试剂盒

说明书

技术领域

本发明涉及葡萄糖测定方法及其测定试剂盒，用于测定血清或血浆中葡萄糖含量，属于体外诊断试剂技术领域。

背景技术

葡萄糖含量是重要的人体生理指标，在临床上应用广泛，需求量很大。血液中葡萄糖，主要来自于食物。它是糖在体内的运输形式，通过糖元生成与糖元分解、糖元异生与糖元酵解、脂肪形成与解脂作用间的相互调节和平衡，血糖的相对恒定对维持机体的正常生理功能有重要意义。目前，葡萄糖含量偏高或偏低的临床表现为：1、葡萄糖升高：高血糖症最常见的是糖尿病。胰腺炎、胰腺癌等弥漫性胰腺疾患，空腹血糖可增高，除严重病例外，一般不超过83mmol/L。抽搐及某些疾病终期，糖元分解加速可出现轻度高血糖；窒息可引起酸中毒及糖元分解增多，结果出现高血糖。感染性疾病、毒血症以及颅内疾患，由于机体内对病理损伤的反应，可能出现明显的高血糖症。麻醉往往可出现高血糖，血糖升高的程度与麻醉种类和时间长短有关，并出现尿糖。2、葡萄糖降低：血糖值低于2.8mmol/L，可诊断为低血糖。最多见于接受超剂量胰岛素治疗的糖尿病患者。甲状腺功能低下和肾上腺皮质功能低下患者，血糖可降至正常值范围以下。由于肝糖元分解过程中某些酶的缺陷而引起的肝糖元累积病，糖元不能转化为葡萄糖，也可能出现低血糖。慢性腹泻吸收不良及脂肪泻，由于葡萄糖吸收障碍可使血糖降低；剧烈运动可产生低血糖，肝脏病由于肝糖元储备不足，有时可出现低血糖。

目前临床常规实验室直接分离测定葡萄糖的方法大致可分为两种。第1种为葡萄糖氧化酶法，葡萄糖在葡萄糖氧化酶(GOD)催化下，生成葡萄糖酸和过氧化氢。过氧化氢与4-氨基安替吡啉和对溴苯酚生成红色化合物。在一定范围内，红色深浅与葡萄糖量成正比，从而可求得血清中葡萄糖浓度。第2种采用己糖激酶法，葡萄糖与ATP在己糖激酶催化下生成葡萄糖-6磷酸和ADP。G6PDH催化G6P与NAD⁺，形成6-磷酸葡萄糖内酯(6-PG)及NADH。NADH生成与样本中葡萄糖浓度成正比。这两种方法中葡萄糖氧化酶测定法成本低廉，使用范围较广、更易被临床接受，因此采用葡萄糖氧化酶法进行葡萄糖试剂盒的研制。

发明内容

葡萄糖含量测定试剂盒采用葡萄糖氧化酶法的反应原理，血清(血浆)中的葡萄糖在葡萄糖氧化酶的催化作用下分解为葡萄糖酸和H₂O₂，生成H₂O₂应用Trinder显色反应测定葡萄糖的含量，该显色反应生成醌式染料，此染料在492nm/620nm有最大吸收，吸收强度与样本中的葡萄糖含量成正比。

根据此反应原理，葡萄糖含量测定试剂盒包括酶标板、试剂1和标准液，试剂1由葡萄糖氧化酶、过氧化物酶等成份组成。标准液为葡萄糖标准液。

采用的测定方法为，于酶标板上，设一孔试剂空白孔，两孔标准孔，其余为测定孔。加试剂1：200μl，空白孔内加蒸馏水2μl，标准孔内分别加校准液2μl，测定孔分别加入待测血清(血浆)2μl，混匀置37℃温育10分钟。于酶标仪比色，在主波长492nm副波长620nm下，试剂空白孔调零，进行检测。测定结果按以下公式计算葡萄糖含量：血清(血浆)葡萄糖浓度＝测定孔吸光度/标准孔吸光度×100(mg/dL)。

本发明测定葡萄糖的方法和测定试剂盒，适用于酶标仪，由于酶标仪成本低廉，设备要求简单，无需购买昂贵的全自动生化仪，同时弥补了半自动生化仪对同一指标大规模检测能力的不足，比手工操作肉眼比色大大减少了工作量和人为误差；实验操作简便，一次可以检测近百份样本，几十分钟即可得到检测结果。测定结果计算方便，数据可保留或打印，利于实验室标准化管理及网络化建设。

具体实施方式

下面用实施例进一步说明本发明。本发明的实施例是用于说明本发明而不是对本发明的限制。下列实施例中未注明具体条件的实验方法，通常按照本领域的常规条件进行。

实施例一：

试剂盒的组成为：试剂1和标准液，

其中试剂1的组成为对溴苯酚5mmol/L，磷酸盐缓冲液pH7.0，葡萄糖氧化酶5KU，过氧化物酶5KU，4-氨基安替吡啉5mmol/L。

葡萄糖标准液100mg/dL。

实施例二：

测定方法如下：

1.于96孔酶标板上，设一孔试剂空白孔，两孔标准孔，其余为测定孔。加试剂1：200μl，空白孔内加蒸馏水2μl，标准孔内分别加校准液2μl，测定孔分别加入待测血清(血浆)2μl，混匀置37℃温育10分钟。