[发明专利]一种双液相系统中生物降解植物甾醇制备“雄烯二酮”的方法

权利要求书

1、一种生物药业制剂，具体地说是“一种双液相系统中生物降解植物甾醇制备 “雄烯二酮”的方法”。

2、根据权力要求1所述的微生物选择性降解植物甾醇侧链获取甾体药物合成的 重要中间体“雄烯二酮”的制备方法。

3、根据权力要求1所述的微生物选择性降解植物甾醇侧链获取甾体药物合成的 重要中间体“雄烯二酮”的培养基。斜面培养基(M1，％)：葡萄糖1；酵母膏0.5；聚 蛋白胨0.5；琼脂粉2，KH₂PO₄ 0.1，NH₄NO₃ 0.1，pH7.0～7.2；种子培养基(M2，％)： 糖蜜6.0，葡萄糖0.8，KH₂PO₄ 0.06，NH₄NO₃ 0.5，消后pH 7.0～7.2；转化培养基 (M3，％)：糖蜜6.0，甾醇1，甘油16，KH₂PO₄ 0.06，NH₄NO₃ 0.5，pH8.2～8.4。

4、根据权力要求1所述的微生物选择性降解植物甾醇侧链获取甾体药物合成的 重要中间体“雄烯二酮”的培养条件。斜面：温度30℃～32℃，生长周期5d；分 离平板：5～7d；摇瓶种子：温度30℃～32℃，转速130r/min，生长周期72h；转化： 接种量10％，温度30℃～32℃，转速250～280r/min，生长周期120～140h。

5、根据权力要求1所述的微生物选择性降解植物甾醇侧链获取甾体药物合成的 重要中间体“雄烯二酮”的制备技术。(1)对不同浓度乙醇/水、甘油/水、葵 花油/水组成的系统进行有机溶剂/水双相系统转化实验，选择最佳有机溶剂； (2)根据权力要求1所述的微生物选择性降解植物甾醇侧链获取甾体药物合成 的重要中间体“雄烯二酮”的各种添加剂对系统的影响实验，在以上试验基 础上，在系统中分别添加不同浓度表面活性剂(吐温-80)、抑制剂(8-羟基喹 啉，2，2’-联吡啶，氯化汞等)，研究各种添加剂对转化率的影响。

6、根据权力要求1所述的微生物选择性降解植物甾醇侧链获取甾体药物合成的 重要中间体“雄烯二酮”的植物甾醇转化率的检测方法。岛津GC-14气相色谱 系统.色谱条件：色谱柱为PEG-20M不锈钢柱(4×2mm)，柱温采用程序升温，起始 柱温210℃维持3min，再以30℃/min的速率升至280℃，维持10min.含量用外标 峰面积法计算.

7、根据权力要求1所述的微生物选择性降解植物甾醇侧链获取甾体药物合成的 重要中间体“雄烯二酮”的植物甾醇转化率的计算方法。发酵完成后，用乙酸 乙酯以1∶1的比例提取4AD，然后稀释100倍，再用气相色谱定量测出雄烯二 酮的含量，然后运用以下公式计算植物甾醇的转化率：转化率＝提纯后有机相 中AD含量×100％/(投料油中甾醇含量×0.66×0.95)。