[发明专利]改良罗氏快速培养基及其制备方法

说明书

技术领域

本发明涉及一种改良罗氏快速培养基，还涉及一种培养基的制备方法。

背景技术

目前我国普遍使用一种被称之为“罗氏培养基”的固体结核菌培养基来对结核菌进行体外人工分离培养，这些记载在福州部队总医院编、朱忠勇、陈之航主编、上海科学技术出版社1978年4月出版的《临床医学检验》第454页上。由于现有的固体结核菌培养基均是靠各医院去配制而无现成产品可购，这就需要院方单独为此添置一套相应的生产设备，既加大了医院的设备开支，又相应增加了配制工作量。经检索中国专利，专利申请号98 1 10068其技术方案是：由基础物质、能量物质、植物生长刺激物质混合配制而成，基础物质中有磷酸二氢钾、硫酸镁(MgSO。·7HZo)、构榜酸镁、柠檬酸铁按、天门冬酞胺、中性甘油、马铃薯粉、新鲜鸡蛋液、2％孔雀绿水溶液、水、动物血清，能量物质中有辅酶A、三磷酸腺昔、细胞色素丙，植物生长刺激物质中有Q一蔡乙酸，每1000克结核菌快速培养基中各组分的含量为：磷酸二氢钾1.36～1.4克、新鲜鸡蛋液560～600克、硫酸镁0.136～0.14克2％孔雀绿水溶液11～13克构榜酸镁0.3～0.4克水300～340克柠檬酸铁钱0.028～0.03克动物血清56～60克天门冬酞胺2.06～2.1克辅酶A 0.4～0.8克中性甘油6～8克三磷酸腺昔0.04～0.08克马铃薯粉17～17.5克细胞色素丙0.045～0.075克。一蔡乙酸0.05～0.1毫克。其步骤是：A、制糊：将17～17.5克的马铃薯粉加150～170克水后，置于沸水浴中加热，时加搅拌，使成均匀糊状，自然降至室温后备用；B、混合调配：将1.36～1.4克的磷酸二氢钾、0.136～0.14克的硫酸镁、0.3～0.4克的构栋酸镁、0.028～0.03克的柠檬酸铁钱、2.06～2.1克的天门冬酞胺、6～8克的中性甘油加150～170克水后，置于沸水浴中加热溶解，待冷至50℃以下时，加入560～600克的新鲜鸡蛋液、56～60克的动物血清、0.4～0.8克的辅酶A、0.04～0.08克的三磷酸腺昔、0.045～0.075克细胞色素丙、0.05～0.1毫克的Q一蔡乙酸，充分搅拌均匀后，再加入167～187.5克的马铃薯粉及11-13克的2％孔雀绿水溶液，并经充分搅匀后得1000克混合物；C、分装及密封；将混合物分装于大试管中，每管分装5克，置成长斜面后，熔封；D、灭菌；采用血清凝固器对大试管进行灭菌，灭菌条件为：头日，85℃，30分钟；次日，80℃，30分钟；第三是，80℃，30分钟。由以上所述可知，固体结核菌培养基的现有配制过程较为复杂和麻烦，故医院只能根据近期内固体结核菌培养基的大致用量予先配制一些备用，但是，全国几千家医院各自分散配制的固体结核菌培养基，均存在着质量标准不一致、成品率不高、不易长期贮存及贮存期稍长因水份散失、药物分解而使检测结果不准的缺陷。临床检测是发现现有的结核菌培养基存在以下缺陷：1、由于现有的固体结核培养基保藏在大试管中，管口用橡皮塞塞紧，故该培养基被密封的程度较差，其内的水份易散失，以至该培养基的贮藏期很短(仅3个月)，这样便不能通过工业化生产手其培养基中需有多种营养物质，而如上所述可知，现有的固体结核菌培养基中营养物质的种类少，另外其内也没有能加快结核菌新陈代谢活动以提高结核菌生长繁殖速度的能量物质和植物生长刺激物质，这样使得结核菌在现有的固体结核菌培养基中不能进行很好地生长繁殖，分裂周期长达12～16小时，要4～6周方能看到菌落。3、有些液体培养基配方复杂，方法繁琐，罗氏培养基需35天。因此，使用现有的结核菌培养基来对结核菌进行体外人工分离培养时，其检测速度相当慢，阳性检出率低，不利于结核病的早期诊断和治疗。

发明内容

本发明的目的在于提供一种简单，实现快速培养结核杆菌培养基，解决了临床早期诊断及有效地治疗的问题。

本发明的另一目的是提供了一种方法易行，操作方便的一种改良罗氏快速培养基的制备方法。

为了达到上述目的，本发明采用以下技术措施：

一种改良罗氏快速培养基，它由下述重量配比的原料制成的培养基：磷酸二氢钾(无水)0.96g，天门冬素(天门冬酰胺)0.27g，枸橼酸0.21g，硫酸镁(MgSO₄、7H₂O)0.084g，纯甘油(中性)4.2ml，2.4-二氯苯氧乙酸钠0.1g，6-糠氨基嘌呤0.1g，蒸馏水120ml，马铃薯粉0.6g，新鲜鸡蛋3-4个，10g/L的孔雀绿溶液8ml。