[发明专利]用于端粒酶抑制的改性寡核苷酸

说明书

本申请是申请号为200480025975.4，申请日为2004年9月9日， 发明名称为“用于端粒酶抑制的改性寡核苷酸”的中国专利申请的分 案申请。

技术领域

本发明涉及用于端粒酶抑制的化合物。更具体地，本发明提供了 靶向端粒酶RNA成分的并具有提高的细胞吸收特性的改性寡核苷酸。

背景技术

用于治疗应用的寡核苷酸的发展

在核酸的医药用途方面存在很大兴趣。例如，在潜在的治疗应用 方面，反义、核糖酶、核糖适体(aptamer)和RNA干扰(RNAI)技 术全部得到了发展。核酸尤其是寡核苷酸用于体内传送的设计需要考 虑各种因素包括结合强度、目标特异性、血清稳定性、对核酸酶的抗 性和细胞吸收。为了生产具有适于体内使用特征的寡核苷酸，已经提 出了多种方法，如改性的主链化学(modified backbone chemistry)、传 送载体中的配方以及与各种其它部分的共轭。具有适于全身传送特征 的疗用寡核苷酸特别有益。

具有改性化学主链的寡核苷酸评述于Micklefield，Backbone modification of nucleic acids：synthesis，structure and therapeutic applications，Curr.Med.Chem.，8(10)：1157-79，2001和Lyer等，Modified oligonucleotides--synthesis，properties and applications，Curr.Opin.Mol. Ther.，1(3)：344-358，1999。

改性的主链化学的实例包括：

-肽核酸(PNA)(参见Nielsen，Methods Mol.Biol.，208：3-26， 2002)，

-封闭的核酸(LNA)(参见Petersen & Wengel，Trends Biotechnol.，21(2)：74-81，2003)，

-硫代磷酸酯(参见Eckstein，Antisense Nucleic Acid Drug Dev.， 10(2)：117-21，2000)，

-甲基膦酸酯(参见Thiviyanathan等，Biochemistry，41(3)： 827-38，2002)

-氨基磷酸酯(参见Gryaznov，Biochem.Biophys.Acta，1489(1)： 131-0，1999；Pruzan等，Nucleic Acids Res.，30(2)：559-68， 2002)，和

-硫代氨基磷酸酯(参见Gryaznov等，Nucleosides Nucleotides Nucleic Acids，20(4-7)：401-10，2001；Herbert等，Oncogene， 21(4)：638-42，2002)。

已经报道了这些类型寡核苷酸中每种的优点和缺点。例如，肽核 酸(PNA)呈现良好的核酸酶抗性和结合强度，但是在测试培养物中 细胞吸收有所降低；硫代磷酸酯展示了良好的核酸酶抗性和可溶性， 但是通常作为P-手性混合物合成并显示出几种序列非特异性的生物效 应；甲基膦酸酯显示了良好的核酸酶抗性和细胞吸收，但是通常也作 为P-手性混合物合成并具有降低的双链体稳定性。N3′→P5′氨基磷酸酯 核苷酸间键合显示了良好的结合特性、核酸酶抗性和可溶性(Gryaznov 和Letsinger，Nucleic Acids Research，20：3403-3409，1992；Chen等， Nucleic Acids Research，23：2661-2668，1995；Gryaznov等，Proc.Natl. Acad.Sci.，92：5798-5802，1995；Skorski等，Proc.Natl.Acad.Sci.，94： 3966-3971，1997)。然而，相对于天然氨基磷酸酯对应物，它们还显示 出升高的酸不稳定性(Gryaznov等，Nucleic Acids Research，24： 1508-1514，1996)。寡核苷酸的酸稳定性对于理想使用寡核苷酸试剂来 作为口服治疗剂是一个重要性质。将硫原子加入N3′→P5′硫代氨基磷 酸酯寡核苷酸主链提供了升高的酸稳定性。