[发明专利]一种小牛血清去蛋白注射液及其生产方法

说明书

技术领域

本发明涉及一种小牛血清去蛋白注射液及其生产方法。

背景技术

以小牛血清为原料经过除蛋白后得到的提取物具有改善细胞代谢的生理作用，在临床上广泛应用于神经科疾病的治疗。目前所有的小牛血清类产品的研究都认为小分子肽是这类产品的主要有效成份，因此所有的产品提取工艺都将提高小分子肽含量作为目标，在生产工艺中使用酸解、酶解等技术将大分子蛋白及多肽切成小分子肽；还有些产品将控制小分子肽含量作为控制有效成分的手段。

发明内容

本发明的目的是提供一种小牛血清去蛋白注射液及其生产方法。

本发明所提供的小牛血清去蛋白注射液的制备方法，包括如下步骤：

1)去除小牛血清中的蛋白，然后进行粗滤，收集滤液；

2)对所述滤液依次用甲苯、乙酸乙酯和正丁醇进行萃取，每次萃取中弃去有机相保留水相；

3)对所述水相采用BIO-GEL-P2凝胶进行层析，以纯化水为流动相，收集280nm检测波长的吸光度曲线上的第二吸收峰，得到小牛血清去蛋白注射液。

所述制备方法中还包括将所得到的小牛血清去蛋白注射液进行病毒灭活的步骤。增加病毒灭活步骤可杀灭非脂包膜病毒和脂包膜病毒，保证产品的生物安全性。所述病毒灭活条件为60℃水浴中保存10小时。

上述步骤2)中，加入的甲苯、乙酸乙酯和正丁醇的体积均大于等于所述滤液的体积。当所述BIO-GEL-P2凝胶层析中柱床高度为120—140cm，柱的直径为4-5cm，所述纯化水的洗脱流速为40ml/h。

由所述的制备方法制备的小牛血清去蛋白注射液也属于本发明的保护范围。

所述方法制备的小牛血清去蛋白注射液的活性成分为多糖，所述多糖的含量为1.0-1.2mg/ml，优选为1.17mg/ml。除所述多糖外，所述注射液中还含有小分子肽类物质；所述小分子肽类物质含量为小于等于0.05mg/ml，优选为0.04mg/ml。

本发明所述的小牛血清去蛋白注射液可用于治疗如下疾病：

a)脑缺血缺氧性疾病；

b)营养障碍性疾病所引起的神经功能缺损(缺血性损害、颅脑外伤)；

c)末梢动脉循环障碍及其引起的动脉血管病；

d)静脉循环障碍及其引起的动脉血管病；

e)皮肤烧伤、烫伤、糜烂(创伤、褥疮)；放射所致的皮肤、粘膜损伤；

e)老年痴呆；

本发明所述的小牛血清去蛋白注射液还可促进伤口愈合，可在皮肤移植术中应用。

对不同患者可依据不同病情给予有效治疗量的小牛血清去蛋白注射液，如每日3次，每次10ml静脉滴注。

本发明的发现存在于小牛血清中的天然多糖的生物活性远远高于小分子肽。它改变了以往对小牛血清类产品的认识，证明了多糖的生物活性比小分子肽更强，而且二者存在竞争性抑制。因此，本发明改进了制备小牛血清去蛋白注射液的方法，改变了传统的提取方法把增加小分子肽作为目标的技术方向，通过萃取和层析步骤，使多糖成为所制备的产品的主要有效成分。这种制备方法，通过萃取去除了低极性的酯类等杂质，提高纯度；通过层析去除了高极性的肽类杂质，解除其对于多糖活性的竞争性抑制，使产品生物活性进一步提高，疗效更好。本发明产品的主要有效成分是多糖，除多糖外小分子肽类物质的含量极低，因此，不容易发生聚合反应，增加了产品的稳定，同时减少了小分子肽类物质的含量，使发生过敏反应的几率大大降低，产品更加安全；并且产品的呼吸活性指数由3.0左右提高到7.0以上，产品疗效进一步提高。本发明所述的小牛血清去蛋白注射液可在脑部缺血性损害，动脉血管病，烧伤等疾病的治疗中应用。

附图说明

图1为吸光度曲线

图2为小牛血清去蛋白注射液的高效液相色谱图

具体实施方式

本发明的小牛血清去蛋白注射液的生产方法如下：

除蛋白：按照乙醇和血清比例为2：1的量向血清中加入96％的乙醇，离心(4000转/分，10分钟)后留上清弃沉淀。利用真空旋转蒸发仪，37℃，1个大气压减压除乙醇，蒸发至血清体积的60％。

粗滤：用截留分子量100000D的中空纤维柱粗滤，收集滤液。

萃取：依次加入甲苯、乙酸乙酯、正丁醇萃取，每次都是除掉有机溶剂保留水溶液。

层析：将萃取所得溶液浓缩至初始血清体积的1/10，用BIO-GEL-P2凝胶层析分离。

上述BIO-GEL-P2凝胶层析的收集液，即为小牛血清去蛋白提取液。

病毒灭活：上述提取液在60℃水浴中保存10小时，杀灭病毒。