[发明专利]一种AFP重组腺相关病毒载体及其构建方法与应用

说明书

技术领域

本发明涉及载体及其应用，特别是涉及一种重组腺相关病毒载体及其构建方法与其在制备抗肿瘤药物中的应用。

背景技术

腺相关病毒(AAV)的基因结构已经被鉴定。1983年，Samulski等人描述了AAV的末端重复片段(上游5’端片段，下游3’端片段)(Samulski RJ，Srivastava A，BernsKI，Muzyczka N.Rescue of adeno-associated virus from recombinant plasmids：gene correction within the terminal repeats of AAV.Cell.33：135-143.)。1984年，Hermonat等人描述了AAV的低感染颗粒(lip)基因和包膜(cap)基因(Hermonat PL，Labow MA，Wright R，Berns KI，Muzyczka N.Genetics ofadeno-associated virus：isolation and preliminary characterization ofadeno-associated virus type 2 mutants.J Virol.51：329-339.Hermonat，P.L.，and Muzyczka，N.Use of adeno-associated virus as a mammalian DNA cloningvector：transduction of neomycin resistance into mammalian tissue culturecells.Proc.Natl.Acad.Sci.U.S.A.81：6466-6470.)。1986年，Labow等人鉴定了位于上游5’端片段和rep基因之间的p5启动子(LabowMA，Hermonat PL，BernsKI.Positive and negative autoregulation of the adeno-associated virus type2genome.J Virol.160：251-258.)。

1984年，美国博沃基因国际有限公司的主要技术技术负责人之一Paul L.Hermonat教授率先证明AAV载体可用于人类疾病的基因治疗(Hermonat，P.L.，andMuzyczka，N.Use of adeno-associated virus as a mammalian DNA cloning vector：transduction of neomycin resistance into mammalian tissue culture cells.Proc.Natl.Acad.Sci.U.S.A.81：6466-6470.)。目前，主要是欧美国家在进行以AAV为基础的基因治疗人类疾病的临床试验。据美国粮食和药品管理局统计，现有十余项以AAV为基础的基因治疗临床试验正在进行，主要是将携带治疗基因的AAV病毒注入患者体内，使其在体内表达治疗基因，从而达到治疗疾病的目的。主要针对治疗的疾病有帕金森氏综合症、风湿性关节炎、血友病、心力衰竭、进行性肌萎缩和奥兹海默综合症等非肿瘤性疾病。但是，应用于临床治疗的AAV病毒仍存在一些问题，例如携带治疗基因大小受到明显限制，病毒本身不稳定，导致治疗基因表达不稳定，以及造成疗效不一致。虽然AAV病毒本身的免疫原性很弱，但所表达的治疗基因容易在患者体内诱发自身免疫反应，甚至导致严重的毒副作用。