[发明专利]一种球孢白僵菌HFW－05菌株及其应用

说明书

技术领域

本发明涉及一种白僵菌菌株及其应用，尤其涉及一种球孢白僵菌HFW-05菌株及其在防治蔬菜粉虱、小菜蛾等害虫的应用。

背景技术

近年来，随着设施蔬菜的发展，粉虱、小菜蛾已成为蔬菜的重要害虫，白粉虱自1976年在我国北方大规模爆发以来，一直危害严重。近几年来，烟粉虱也在北京、河北、新疆、天津、广州等地相继爆发，造成蔬菜特别是设施蔬菜严重损失，严重时可减产达7成以上。小菜蛾是抗药最高的蔬菜害虫，生产防治极其困难。粉虱还能传播多种由病毒引起的疾病。长期以来依靠化学农药对它们进行防治，化学农药污染环境、使蔬菜中残留的有害农药增高、也增加了小菜蛾、粉虱等害虫的抗药性，使其更难以农药防治。随着我国菜篮子工程的发展，设施蔬菜和无公害蔬菜得到了迅猛发展，随之造成粉虱、小菜蛾等害虫的大量发生。对蔬菜产生严重的危害，严重威胁到我国绿色无公害蔬菜的生产和人类的健康，严重威胁着我国农副产品的出口创汇，所以研究开发高效无害化防治的新技术已成为生产上急需解决的问题。

发明内容

本发明的目的就是解决现有技术中存在的上述问题，提供一种对粉虱、小菜蛾和蚜虫等蔬菜害虫具有很高防治效果，且对人类和人类生存的环境没有任何害处的球孢白僵菌HFW-05菌株及其应用。

为完成本发明的目的，本发明的技术解决方案是：一种球孢白僵菌(Beauveriabassiana)HFW-05菌株，保藏号为CGMCC No.2356。其通过如下方法分离获得：从保定市郊蕃茄大棚采集烟粉虱尸体，将采集到的烟粉虱尸体分别研磨后，加入到内装50ml无菌生理盐水和玻璃珠的三角瓶中，在25-27℃，最好为26℃，150-200rpm，最好为150rpm摇床震荡15分钟，静止10分钟后，在超静工作台上取上清液500μl加入4.5ml无菌生理盐水中，分别取以上悬浮液50μl在由1％的蛋白胨、1％的酵母膏、4％的葡萄糖和2％的琼脂混合成的SDAY培养基平板上均匀涂板，每处理重复3次，在25-27℃，最好为26℃的培养箱内培养5-7d，最好为5d，培养后用无菌牙签挑取白僵菌菌落，经纯化后再培养，收集球孢白僵菌孢子粉。以吐温80作为展着剂用水稀释制成浓度为1×10⁸孢子/ml菌悬液，以烟粉虱、小菜蛾的若虫或幼虫为对象进行生物测定，根据不同菌株对上述害虫的毒力效果，最终筛选出了对烟粉虱、小菜蛾高毒力的球孢白僵菌菌株(Beauveria bassiana)HFW-05。

本菌株已于2008年1月24日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心(简称CGMCC)，保藏号：CGMCC No.2356。

本发明还提供了球孢白僵菌HFW-05菌株的发酵方法和应用方法，包括步骤：

1、菌种活化

利用由1％的蛋白胨、1％的酵母膏、4％的葡萄糖和2％的琼脂混合成的SDAY培养基，将球孢白僵菌菌株HFW-05接种于SDAY培养基面上，保持温度25-27℃，培养5-7d，生产出活化好的HFW-05的孢子粉。

2、种子液的培养

种子液培养用由1％的蛋白胨、1％的酵母膏和4％的葡萄糖混合成的SDAY液体培养基，在无菌条件下，刮取活化好的HFW-05的孢子粉，用无菌生理盐水配制成浓度为1×10⁸-5×10⁸孢子/ml的菌悬液，以0.2-0.5％的接种量接种于14升液体发酵罐中，保持温度为25-27℃，转速为150-250rpm，培养1d作为种子液。

3、固相发酵

发酵培养基为大米，用清水浸泡大米3-4h，捞出控去多余水份，再按1kg大米加入5ml食用油的比例，混匀。

发酵器具：大小为50×40cm的具有透气性的塑料袋。

发酵方法：将上述加入食用油的大米200-300克装入塑料袋中，用线绳扎紧袋口，装入灭菌锅内，在121℃下，灭菌30分钟。在超净工作台内每袋接入种子液10ml，接种后单铺放于25-27℃的恒温室的培养架上，培养5-7d。将上述培养物收集，于室内凉干。再用150-200目的振荡筛收集孢子粉。

4、剂型加工：按照可湿性粉剂的加工方法，将菌孢子粉制成50-100亿孢子/克的可湿性粉剂。

5、白僵菌使用方法

防治时期：在烟粉虱、小菜蛾等害虫的发生初期进行喷雾防治，对害虫的栖息、为害的叶背、生长点附近、花等均匀喷洒，每7d喷洒一次，共2-3次；

使用浓度：将每克含白僵菌活孢子50-100亿孢子/克的可湿性粉剂，加水稀释成500-1000倍液，用喷雾器进行喷雾防治。