[发明专利]黃芪甲苷在制备抗乙型肝炎病毒药物中的应用

说明书

技术领域

本发明涉及黄芪甲苷的新用途，特别是在抗乙型肝炎病毒方面的应用。

背景技术

黄芪甲苷(astragaloside IV)为从中药黄芪中提取出来的三萜皂苷类化合物，其分子式为C₄₁H₆₈O₁₄，分子量784，化学名为3-O-β-D-吡喃木糖基-6-O-β-D-吡喃葡萄糖基黄芪皂醇，结构式如下所示。

黄芪是传统中药，祖国医药认为黄芪有补气升阳、利水消肿、益气固表之功效，而将其归属“补气”之药。现代药理研究表明黄芪具有多种功效，黄芪的提取物具有抗水疱性口炎病毒(VSV)，流感病毒、副流感病毒I型、柯萨奇病毒、孤儿病毒等功效。黄芪甲苷具有抗柯萨奇B病毒以及治疗脑血管疾病的疗效(CN1502336A、CN1843370A)。黄芪药材用于多种抗乙肝的复方中药，混合物黄芪总皂苷具有一定的抗乙肝病毒活性，但单体化合物黄芪甲苷抗乙肝病毒的活性没有被发现。

另一方面，乙肝病毒(HBV)可引起病毒性乙型肝炎、肝硬化及肝癌等疾病，严重影响人类的健康。目前针对HBV没有特效药，现在具备疗效的药物如核苷类、干扰素等药物价格昂贵、副作用大。因此开发抗HBV疗效好、价格低，副作用较小的天然药物是目前医药行业的一个热点。

发明内容

本发明要解决的技术问题即是提供一个中药的单体化合物——黄芪甲苷在制备抗乙肝病毒的药物中的应用。

其中，本发明所说的“抗乙肝病毒”包括抑制乙肝病毒表面抗原(如HBsAg)和/或e抗原(如HBeAg)的表达，和/或抑制乙肝病毒DNA(如HBV-DNA)的复制。

本发明人在体外细胞试验时发现黄芪甲苷具有明显地抑制HBsAg和HBeAg的活性，动物体内试验则提示黄芪甲苷对DHBV鸭血清中的DHBVs抗原和DHBV-DNA，以及DHBV鸭肝脏中的DHBV-DNA均有显著的抑制作用。因此，黄芪甲苷可以开发成制备抗乙肝病毒、特别是预防或治疗病毒性乙型肝炎的药物。

具体实施方式

下面用实施例来进一步说明本发明，但本发明并不受其限制。

实施例中所用的黄芪甲苷标准品为成都思科华生物技术有限公司产品，对照品拉米夫定(3TC)取自上海市食品药品监督管理局。

实施例1：体外细胞试验

按照国家卫生部药政局制定的《新药(西药)临床前研究指导原则》(1993)所规定乙肝病毒细胞方法进行体外细胞试验。

1、细胞及细胞培养

本研究采用的实验模型为HepG2 2.2.15细胞，该细胞株被转染了HBVDNA，能产生HBV病毒颗粒。细胞培养液为DMEM培养液，含10％(v/v)胎牛血清，0.03％(g/ml)谷氨酰胺，100IU/ml青霉素，100IU/ml链霉素，380μg/ml G418(抗生素)。细胞于37℃，5％CO₂进行培养。

2、药物的细胞毒性检测

HepG2 2.2.15细胞在96孔细胞培养板中培养48小时后，加入不同浓度黄芪甲苷培养液(800，400，200，100，40μg/ml)及作为对照的拉米夫定培养液，继续培养9天(每3天换液一次)，用MTT法检测细胞存活率，确定药物对HepG2 2.2.15细胞的毒性浓度。

3、药物对HBsAg和HBeAg的抑制率检测

HepG2 2.2.15细胞在96孔细胞培养板中培养48小时后，加入不同浓度黄芪甲苷培养液及作为阳性药物对照的拉米夫定培养液(无毒浓度下)，继续培养9天(每3天换液一次)，收集上清液，用上海实业科华生物技术公司的HBsAg和HBeAg诊断试剂盒(ELISA)检测HBsAg和HBeAg(按试剂盒说明书进行操作)。

抑制率(％)＝(未用药的抗原值-用药的抗原值)/未用药的抗原值×100％

实验结果