[发明专利]聚酮化合物和其它天然产物的产生

权利要求书

1.产生掺入非天然起始单元的FBKP-配体类似物的方法，所述 方法包括：

(a)产生重组菌株，其中至少rapK同源物已经被缺失或失活；和

(b)将非天然起始单元送料至所述菌株。

2.权利要求1的方法，该方法还包括缺失一个或多个其他辅助 基因。

3.权利要求1或2的方法，其还包括通过互补恢复一个或多个 缺失的基因。

4.权利要求1-3中任一项所述的方法，其还包括分离和纯化 所产生的FKBP-配体类似物的步骤。

5.根据权利要求1-4中任一项所述的方法，其中所述非天然 起始单元选自2-降冰片烷羧酸、2-(顺/反)-羟基环己烷羧酸、3-(顺/反)- 羟基环己烷羧酸、4-(顺/反)-羟基环己烷羧酸、2-(顺/反)-甲基环己烷羧 酸、4-(顺/反)-甲基环己烷羧酸、3-(顺/反)-甲氧基环己烷羧酸、4-(顺/ 反)-甲氧基环己烷羧酸、4-氧代环己烷羧酸、2-氧代环己烷羧酸、4-反 -正戊基环己烷羧酸、2-反-氨基环己烷羧酸、4-顺-氨基环己烷羧酸、 4-(顺/反)-氨基甲基环己烷羧酸、环戊烷羧酸、环丁烷羧酸、1-甲基环 己烷羧酸、3-反-羟基-4-顺-氟环己烷羧酸和4-反-羟基-3-顺-氟环己烷羧 酸、3-顺-羟基-4-反-氟环己烷羧酸和4-顺-羟基-3-反-氟环己烷羧酸、3- 顺-羟基-4-反-氯环己烷羧酸和4-顺-羟基-3-反-氯环己烷羧酸、3-反-羟 基-4-顺-氯环己烷羧酸和4-反-羟基-3-顺-氯环己烷羧酸、3-反-氧化环己 烯羧酸、3-顺-氧化环己烯羧酸、3，4-顺-二羟基环己烷羧酸和3，4-反-二 羟基环己烷羧酸、环己烷乙酸、环己烷丙酸和4-顺/反-叔丁基环己烷 羧酸或者其简单酯或者盐。

6.根据权利要求5的方法，其中所述非天然起始单元选自：3-(顺 /反)-羟基环己烷羧酸、4-(顺/反)-羟基环己烷羧酸、3-(顺/反)-甲氧基环 己烷羧酸、4-(顺/反)-甲氧基环己烷羧酸、4-氧代环己烷羧酸、环丁烷 羧酸、3-反-羟基-4-顺-氟环己烷羧酸和4-反-羟基-3-顺-氟环己烷羧酸、 3-顺-羟基-4-反-氟环己烷羧酸和4-顺-羟基-3-反-氟环己烷羧酸、3-顺- 羟基-4-反-氯环己烷羧酸和4-顺-羟基-3-反-氯环己烷羧酸、3-反-羟基 -4-顺-氯环己烷羧酸和4-反-羟基-3-顺-氯环己烷羧酸、3-反-氧化环己烯 羧酸、3-顺-氧化环己烯羧酸、3，4-顺-二羟基环己烷羧酸和3，4-反-二羟 基环己烷羧酸、环己烷丙酸、4-顺/反-叔丁基环己烷羧酸或者其简单酯 或盐。

7.根据权利要求5的方法，条件是送料于所述重组菌株的非天 然起始物不是：环己烷羧酸、3-顺，4-反-二羟基环己烷羧酸、1-环己烯 羧酸、3-环己烯羧酸、环庚烷羧酸、3-(顺/反)-甲基环己烷羧酸、4-(顺 /反)-甲基环己烷羧酸、1-环庚烯羧酸或者5-顺-羟基-3-环己烯羧酸。

8.根据权利要求1-7中任一项所述的方法，其中(a)部分的重组 菌株是根据包括以下步骤的方法制备的：

(a)在dam^-、dcm^-或dam^-和dcm^-的大肠杆菌菌株中构建接合缺失 质粒；

(b)从适于接合的所述宿主菌株产生孢子，其中所述菌株生长在10 ％到40％的湿度中并且孢子在5到30天收获；

(c)在培养基中将步骤(a)的大肠杆菌菌株与来自步骤(b)的孢子接 合，其中每升该培养基含有：

i)0.5g到5g玉米浆粉，

ii)0.1g到5g酵母提取物，

iii)0.1g到10g碳酸钙；和

iv)0.01g到0.5g硫酸铁；

所述培养基还含有细菌培养用琼脂和淀粉并且已经被干燥导致 1-20％重量损失；和

d)任选在适于产生聚酮化合物的条件下培养重组菌株。