[发明专利]CA27.29、TPS、CYFRA21－1乳腺癌胶体金三联检诊断试剂盒及其制备方法

说明书

技术领域

本发明涉及一种诊断肿瘤的试剂盒，尤其涉及一种乳腺癌胶体金三联检诊断试剂盒，本发明还涉及该试剂盒的制备方法以及该试剂盒在诊断乳腺癌中的应用，属于生物医学领域。

背景技术

乳腺癌是世界上最常见的上皮细胞肿瘤，对人类的健康和生存构成重大威胁，是世界各国面临的最重要的社会问题之一。时至今日，乳腺癌占全身恶性肿瘤的7％-10％，其发病率呈逐年上升趋势，自1980年以来每年以3％的速度增长，特别是北美、西欧等发达国家，表现的尤为明显。全世界每年约有120万妇女发生乳腺癌，其中，有50万妇女死于乳腺癌。2006美国癌症协会，国际癌症学会和国际乳腺癌联合体有关乳腺癌的统计资料显示：在女性人口中，每8位就有1位将遭受乳腺癌的威胁。平均每2分半钟就有1位女性被诊断为乳腺癌患者。在2006年，平均每13分钟就有1位女性死于乳腺癌。仅在2006年，有212,920位女性受到乳腺癌的侵袭，大约有40,970位患者将面临死亡。

在目前乳癌发病机理不清楚的情况下，最好办法就是早期发现、早期诊断与早期治疗，这是提高乳腺癌疗效的关键。

肿瘤标志物是由肿瘤组织和细胞产生的异常表达的生物活性物质，根据其生化或免疫特性可以识别或诊断肿瘤。多数乳腺癌患者血清中都会出现针对某些肿瘤标志物的抗体，且与疾病的相关性已得到认可，所以肿瘤标志物检查对乳腺癌的诊断和疗效评价方面都具有重要的意义。

CA27.29是一种与肿瘤相关的粘蛋白抗原，其分子是O-连接的低聚糖蛋白，分子量很大。目前，已知由人类MUC-1基因编码的与乳腺癌相关的抗原分别有MAM6、乳汁粘蛋白、CA27.29和CA15-3。用这些抗原制备的单克隆抗体，能够不同程度地定量检查患II期或III期乳腺癌妇女的癌症复发情况。据有关资料报道，肿瘤相关抗原CA27.29对预测II期或III期乳腺癌病人复发情况具有较高的特异性(达99％)和准确率(88％)。美国食品和药品管理局(FDA)近期已批准使用RIA CA27.29。临床上，通常用40U/ml(RIA)作为正常值的上限。对乳腺癌和卵巢癌转移的病人，特别是经治疗后临床上无疾病症状的病人，在定期进行血清CA27.29检查时发现，测定值大于40U/ml的病人比测定值小于40U/ml或等于40U/ml的病人，其存活率要低得多。

组织多肽特异抗原(TPS)是细胞角蛋白片段18上的M3抗原决定簇，血清中组织多肽特异抗原含量的高低是衡量肿瘤细胞分裂和增殖活性的一个较为特异的指标。研究表明，组织多肽特异抗原在肿瘤的早期诊断、预测复发和转移、评价预后方面有独特的价值。与传统的肿瘤标志物如甲胎蛋白、癌胚抗原等不同的是，组织多肽特异抗原是“肿瘤活性依赖型”的，它在血清中含量的高低与正在分裂、增殖的肿瘤细胞的数目有关，即与肿瘤的活性有关；而甲胎蛋白、癌胚抗原等则是“肿瘤容量依赖型”的，与肿瘤的瘤体负荷即肿瘤细胞的数目有关。因此，在肿瘤的早期，在出现肉眼复发或转移之前，由于肿瘤细胞数目较少，那些反映肿瘤容量的标志物的血清水平往往是很低的，而此时肿瘤细胞分裂、增殖活跃，因而组织多肽特异抗原含量可以很高，从而有利于早期发现、早期诊断和防治。

CYFRA21-1是细胞角蛋白19片段抗原21-1(cytokeratin 19 fragmentantigen 21-1)的英文缩写，1992年BODENMULER等采用杂交瘤技术制备出BM19.21和KS19.1两株单克隆抗体，经配对组成免疫测定方法，可特异性的识别细胞角蛋白19的片段抗原。在正常情况下细胞角蛋白19在外周血、骨髓、淋巴结中无表达或低表达，而在恶性上皮癌中，激活的蛋白酶加速了细胞的降解，使得大量可溶性的CYFRA21-1被释放，造成血液中CYFRA21-1浓度升高。CYFRA21-1作为一种新的上皮来源性质的肿瘤标志物，近几年来在肿瘤临床的应用越来越广泛，在许多上皮性癌如肺癌、鼻咽癌等都有不同程度的检出率；文献报道乳腺癌患者血清CYFRA21-1水平与临床分期有关，但其阳性率不高，仅为21.2％，但与良性肿瘤组差异有显著性，CYFRA21-1阳性率随临床分期及有无转移或复发的程度增加而上升。由于相关上皮起源的肿瘤都可能表达CK19，因此CYFRA21-1的检测亦可出现假阳性，这需要结合临床资料及通过追踪观察加以排除。

单独检测上述某一肿瘤标志物指标，并不能提供更多的信息，检测灵敏度和特异性都比较低，很难检测出早期或复发乳腺癌患者，容易出现误诊或漏诊。

发明内容