[发明专利]一种用于原产地人参保护的HPCE指纹图谱鉴别方法

说明书

技术领域

本发明涉及一种用于原产地人参保护的HPCE指纹图谱鉴别方法， 属于毛细管电泳分析技术领域。

背景技术

人参是多年生草本植物，属于五加科植物的干燥根。主根肉质，圆 柱形或纺锤形，须根细长；根状茎(芦头)短，上有茎痕(芦碗)和芽 苞。人参主要产于大小兴安岭和长白山。其中，尤以长白山地区出产的 人参品质更优。但是由于人参种类和生长的地理环境不同、炮制方法不 同，导致价格差别很大，所以鉴别人参的真伪、优劣是当务之急。目前 人工种植的人参一般称为“园参”；将园参刺成蜂窝状后用糖水浸泡， 晾干后就称为“白参”；将幼小的野山参移植于田间或将幼小的园参移 植于山野而成长的人参称为“山参”。目前尚无原产地人参的国标推荐 鉴别方法，有报道的人参检测方法主要是高效液相色谱的分析研究，用 Zorbax SB-C18色谱柱，在203nm用乙腈-水做流动相进行梯度洗脱，共 标示出人参药材指纹图谱中18个共有峰，并对10批人参药材谱图的相 似度结果进行了计算。该方法的主要缺点是：高效液相色谱法分析人参 的指纹图谱，检测分离的物质较少，仅仅从成分的含量上给出差异，没 有各自产地的指纹区，而且该测定方法比较复杂，分析周期长，耗材费 用高，色谱柱易污染且不容易清洗。

发明内容

本发明的目的在于提供一种可以显著显示指纹区，步骤简单，周期 短，耗费低，检测准确的原产地人参指纹图谱的毛细管电泳检测方法。

本发明的技术方案是这样实现的：这种用于原产地人参保护的HPCE 指纹图谱鉴别方法，其特征在于包括如下步骤：

A、建立原产地人参指纹图谱

以同一产地的人参为标准品，通过毛细管电泳分析建立其电泳指纹 图谱；

B、检测样品

取待检测的人参样品分别与标准品相同的条件检测，得出检测样品 的谱图，将两者的指纹图谱用直接观察法或指纹图谱软件分析作为定性 依据。

所述的用于原产地人参保护的HPCE指纹图谱鉴别方法，其特征在于 包括如下步骤：

A、对标准品人参进行前处理：将人参药材于烘箱内60℃干燥4h， 粉碎、过筛收集80mesh以下细粉，称量3.0g，加80％乙醇溶液热回 流提取2次，每次3h，合并滤液后自然过滤，然后旋转蒸发后，二次 加水定容至10mL，阴冷处放置12h，取上层清液，0.22μm纤维素膜 过滤，滤液作为供试品溶液；

B、电泳条件：

分离柱：75cm×75μm，有效长度65cm的未涂层毛细管柱；

缓冲溶液：20mmol/L硼砂溶液；有机添加剂：1％尿素水溶液；

检测波长：243nm；分离电压：18KV；毛细管温度：室温18～22℃；

进样方式：气动进样；

进样时间：3S；

进样压力：8KPa；

冲洗气：空气；

C、指纹图谱建立：按A步骤制备的标准品供试溶液，按B步骤电 泳条件测定，记录主组分峰和共有峰在30min之内出现的电泳图，标 定36个特征峰。

D、取市售的人参样品分别与标准品相同的条件处理和测定，得出 检测样品的电泳图，将两者的指纹图谱相比较将两者的指纹图谱相比较 以判定是否为同一产品。

方法学的考察

A、参照物的选择：

取标准品L-赖氨酸用超纯水溶解后定容于容量瓶中，配制成浓度为 2.5μmol/L的标准溶液，用孔径0.22μm纤维素膜过滤，按照上述步骤 电泳条件进行高效毛细管电泳仪分析，根据L-赖氨酸标准样品的电泳峰 的保留时间作为定性标准。同时将人参标准品溶液和L-赖氨酸标准溶液 按体积比1:1混合，按照上述电泳条件进行高效毛细管电泳仪分析， 峰高加高定性法确定2号峰为L-赖氨酸。由于2号峰(L-赖氨酸峰)与 邻组分分离良好，因此作为参照峰。

B、方法精密度的测定：

取长白山生晒园参同一供试品溶液，按照上述实验条件，平行测 定5次，计算其中8个主组分峰相对于内标物峰的相对迁移时间和相对 峰高值，结果见表1，指纹图谱见图2。

                 表1 仪器精密度的测试结果