[发明专利]苏木水提取液制备方法及其应用

说明书

技术领域

本发明涉及一种以中药为原料制备水提取液的方法，具体为一种苏木水提取液制备方法及其应用。

背景技术

苏木(别名：戈梅芳、苏枋、苏方、苏方木、棕木、赤木、红柴)为豆科云实属植物苏木Caesalpinia sappan L.的干燥心材。四季皆收，但以秋天为好。伐取树干或粗枝，削去外皮和边材白木，取中间紫红或红黄色心材，放通风处阴干即可。

苏木分布于广西、广东、台湾、贵州、云南、四川等地。药用苏木含有巴西苏木素(brasilin)，巴西苏木红素(brasilein)等多种成分。

我国古代对苏木的临床应用有许多论述。《唐本草》记载：主破血，产后血胀闷欲死者。《海药本草》记载：主虚劳血癖气壅滞；产后恶露不安，腹中搅痛；及经络不通，男女中风，口噤不语。宜细研乳头香细末方寸匕，酒煎苏方去滓调服，立吐恶物瘥。《日华子本草》记载：治妇人血气心腹痛，月候不调及蓐劳。排脓止痛，消痈肿扑损瘀血，女人失音，血噤，赤白痢并后分急痛。《医林纂要》记载：补心散瘀，除血分妄作之风热。《用药心法》记载：苏木，去风与防风同用。《本草纲目》记载：苏木具有“破血，排脓止痛”的功效。《本草求真》记载：苏木，功用有类似红花，少用则能和血，多用则能破血。但红花性微温和，此则性微寒凉也。故凡病因表里风起，而致血滞不行，暨产后血晕胀满以(欲)死，及血痛血瘕、经闭气壅、痈肿、跌扑损伤等症，皆宜相症合以他药调治。

目前对苏木的研究成果比较多，例如专利号为20041000047593公开的 一种苏木提取物的新用途，该专利提供了一种苏木提取物的制备方法，主要特点是用乙醇回流提取，并指出该提取物能够治疗脑血流供应不足所引起的疾病。专利号2004100441119公开了一种苏木乙酸乙酯提取物及其作用的专利申请，并指出了该提取物能够显著消除器官移植产生的排异反应，该提取物也是利用了一些传统的提取方法，例如煎煮法、超声振荡提取法、渗漉法、超临界淬取法等。相关的对于苏木医疗作用研究的文章也很多。

发明内容

本发明为为了解决中药苏木的开发利用的问题而提供了一种苏木水提取液制备方法及其应用。

本发明是由以下技术方案实现的，一种苏木水提取液制备方法，包括以下步骤：

(1)、称中药苏木加4-7倍水，煎煮30-60min，收集上清液；具有最佳效果的数据为加5倍水，煎煮40min，

(2)、重复上述第(1)步，合并上清液，对上清液离心，再取离心后得到的上清液浓缩到浓度为1-2g/ml；最佳数据为1g/ml，

(3)、对上步骤浓缩后得到的浓缩液离心，分二次进行超滤，孔径：相对分子量分别为6k和3k，收集过滤液，合并。此法比水提醇沉，或醇提水沉等中药传统提取方法可较多地保留有效成分。

(4)、在合并过的滤液中加入滤液质量0.1-0.5％的蛋白质(Albumin)，在50-60℃，10-20min条件下充分反应。其主要目的是消除水提取液中残留的微量杂质。最佳数据为0.2％的蛋白质(Albumin)，在56℃，15min条件下充分反应。

(5)、超滤，孔径：相对分子量分别为3k，收集过滤液。

(6)、调pH值，灭菌，得到苏木水提取液。

本发明所述方法得到的苏木水提取液对治疗腹水瘤和白血病效果显著，见 表1和图1，以下为治疗效果统计，

表1

实验小鼠H22肝癌腹水瘤采用腹腔接种，1X10⁶个细胞/只，24h后分别经静脉和腹腔给药，每种途径以50,100mg·kg-1·d-1，剂量，连续给药7d。对照组注射相同体积的生理盐水，观察各组荷瘤小鼠生存时间，重复实验2次，观察60d，超过60d按60d计算。分别计算用药组的生命延长率。从表1可见腹腔治疗腹水瘤小鼠其生命延长率可达193.4％。

将K562(人红髓白血病细胞株)悬液调整为1×10⁶个细胞/ml，加入24孔培养板中，1000ul/孔。再将不同浓度的苏木提取液加入到细胞悬液中，100ul/孔。对照组每孔加100ul生理盐水，混匀，放人37℃，5％CO₂培养箱中培养36h。收集细胞，加人适量PBS离心洗1次。样本细胞中加入5ul rhAnnexinV-PE，混匀，在室温避光放置20min，再加人适量PRS离心洗1次，弃上清。沉淀中加入PBS液500ul，混匀。1h内流式细胞仪测定。如图1所示意的结果表明，苏木水提取液可在36小时内杀死99.6％的癌细胞。