[发明专利]罗汉果苷V的制备方法

说明书

技术领域

本发明涉及植物提取物的纯化，具体是从罗汉果提取物中制备罗汉果苷V的方法。

背景技术

罗汉果，为葫芦科植物罗汉果属多年生草质藤本植物罗汉果Momordica grosvenori Swingle的干燥成熟果实，为一常用中药，具有清热解暑、润肺止渴作用，临床上可用于治疗高血压、肺结核、哮喘、胃炎、百日咳、急慢性支气管炎和急慢性扁桃体炎等多种疾病，同时罗汉果也是常用饮料干果，提取物是常用甜味剂，大量出口，远销日本、韩国、台湾、东南亚、加拿大、美国等地。

罗汉果及罗汉果提取物中的主要成分为葫芦烷型三萜皂苷，包括罗汉果苷IV(mogrosideIV)、罗汉果苷V(mogroside V)、赛门苷I(siamenoside I)、11-氧-罗汉果苷V(11-oxo-mogrosideV)、罗汉果苷II_E(mogroside II_E)、罗汉果苷III_E(mogroside III_E)等多种皂苷，其中罗汉果苷V为主要皂苷类成分。罗汉果苷V也是罗汉果的主要甜味成分，其甜度高，为蔗糖的四百多倍。由于制药工业及食品工业的发展，目前国内外对高纯度的罗汉果V的需求量非常大，但目前尚未见有高纯度的罗汉果苷V生产、销售。虽有多项专利申请涉及罗汉果甜苷的提取，方法简单，但所得产物为罗汉果总苷，提取物中罗汉果苷V的纯度均较低，不超过80％，限制了其应用范围和发展前景。

公开号为CN101029071A的“从罗汉果中制备高纯度罗汉果苷V的方法”是将醇浸膏用乙醇乙酯萃取，继用正丁醇萃取得正丁醇浸膏，再用聚酰胺柱处理正丁醇浸膏得粗皂苷，然后用氯仿—甲醇—水作为流动相进行硅胶柱层析，最后进行C18反相硅胶柱层析，水洗、乙醇洗脱、收集纯度在95％以上的流分得纯度大于95％的罗汉果苷V。该法使用的氯仿、甲醇毒性较大。硅胶柱层析的收得率低，C18反相硅胶柱层析的纯化效果不理想，收得率也低，只有50％左右，而且操作过程复杂，对流出物需分成小分(如接收的每一小杯20ml)都要频繁进行HPLC检测，不利于实际生产应用。

发明内容

本发明的目的是提供新的操作方便、收得率高、产品纯度高、纯化效果好的罗汉果苷V的制备方法，该方法能顺利地应用于规模化生产实际，并可降低生产成本。

本发明提供的罗汉果苷V的制备方法，包括粗苷的硅胶柱层析和后续的C18反相柱层析，

(1)在对含有罗汉果苷V的粗苷进行硅胶柱层析时，用两种比例的二氯甲烷/乙醇混合物作为流动相进行两次洗脱，第二次洗脱时的流动相中二氯甲烷的比例小于第一次洗脱时的流动相，收集第二次洗脱的组份，浓缩干燥后得A；

(2)将A进行C18反相柱层析时，用乙腈/水混合物洗脱，通过紫外检测器结合记录仪监控，收集波长为198nm～220nm时记录仪显示的峰值最大的峰所代表的组份，浓缩干燥即得。

本发明中，两种比例的二氯甲烷/乙醇混合物的重量比例分别为58/42～70/30，45/55～55/45。其中的乙醇为市售的重量百分浓度为95％产品。

新的罗汉果苷V的制备方法，硅胶的粒度为200～300目，上样量为硅胶重量的1/40～1/20，第一次洗脱时，流动相的用量为硅胶重量的5～10倍(体积/重量，ml/g或L/kg)，第二次洗脱时，流动相的用量为硅胶重量的10～20倍(体积/重量，ml/g或L/kg)，当第二次洗脱有5倍流动相进入硅胶后，开始收集流出的组份，直至规定量的流动相洗脱完毕。

在本发明的罗汉果苷V的制备方法的第二步将A进行C18反相柱层析时，所用流动相乙腈/水混合物的体积比为20/80～30/70。监控时紫外检测器的波长设于200nm～210nm。C18反相柱层析的反相填料的粒径为20μm～50μm，上样量为反相填料重量的1/250～1/180。

本发明在对罗汉果粗苷进行硅胶柱层析时，采用梯度层析，即进行两次洗脱。第一次洗脱时所用流动相的二氯甲烷比例较高，由于粗苷中苷V以及其它苷类溶于水，而脂肪酸、油脂、黄酮、甾体类属于脂溶性成份，所以二氯甲烷比例较高的流动相可以有效地洗除脂溶性成份，而将苷V及其苷类留在柱中。第二次洗脱时，二氯甲烷的比例降低，适当提高乙醇比例，从而增大了流动相的极性，有利于水溶性成份的洗脱，但是，乙醇比例不能无限制提高，本发明经过实验验证，乙醇比例在45％～55％之间，有利于最大限度地洗脱苷V而将其它苷类仍留在柱中，从而使罗汉果苷V与其它苷类得到很好的分离。