[发明专利]用罗丹明S双酶催化分光光度法测定葡萄糖的方法

说明书

技术领域

本发明涉及分析化学领域，特别是一种用罗丹明S双酶催化分光光度法测定葡萄糖的方法。

背景技术

葡萄糖是生物体内具有极其重要的生理意义，它是人体中能量的来源，同时也是预测某些疾病(如糖尿病及其并发症)的风向标。众所周知，体液中葡萄糖含量的高低是标志着人体健康状况的重要指标，尤其是糖尿病人的体液葡萄糖监控，葡萄糖浓度的突然升高与降低都预示着异常情况的发生，所以，准确测定葡萄糖对临床治疗，及对预防疾病具有非常重要的意义。由于蛋白质，核酸和葡萄糖是很重要的生物宏观分子，它们是高密度信息的携带和基因信息的传递，葡萄糖参与许多生理学和病理学的过程，掌控着许多疾病的发生和治愈，葡萄糖的检测不仅在医药工业，临床诊断被重视，而且在生物化学和食品工业等其他研究领域也很受欢迎，最近几年，葡萄糖性能的研究已经有了大的进步，同时，也为葡萄糖的分析检测带来了大的挑战。目前，葡萄糖的检测方法有滴定法，分光光度法，磷光光度法，化学发光法，荧光法，电化学法，气相色谱法，高效液相色谱法，葡萄糖传感器等。建立在酶催化反应基础之上的葡萄糖传感器，由于简单、高灵敏和具有专一性，越来越受欢迎。在葡萄糖传感器中常用的酶是葡萄糖氧化酶，大多数方法是由在空气中氧的存在下葡萄糖氧化酶氧化葡萄糖产生葡萄糖酸和过氧化氢，葡萄糖的浓度与氧气降低的浓度和过氧化氢增加的浓度是成比例的，这样，通过检测氧气的减少和浓度和过氧化氢增加的浓度可以间接检测葡萄糖的浓度。葡萄糖传感器检测葡萄糖选择性高，但同时也存在酶的固定化或电极修饰手续繁琐、酶柱或电极使用寿命较短、天然过氧化物酶价格昂贵、易变性失活、反应条件苛刻等问题。

建立一种灵敏度高、选择性好、操作简便、快捷的方法很有必要。分光光度法具有简便、快速，仪器价廉，易操作等特点而在许多领域得到广泛的应用。目前应用碘化钾-辣根过氧化物酶-葡萄糖氧化酶-罗丹明S催化体系分光光度法测定痕量葡萄糖的方法尚未见报道。

发明内容

本发明的目的是要提供一种用罗丹明S双酶催化分光光度法测定葡萄糖的方法。

本发明是这样实现的：在5mL具塞比色管中，分别加入0.05～0.50mL pH4.6的HAc-NaAc缓冲溶液和0.05～0.50mL 0.04mol/L KI溶液，然后加入0.05～1.0mL 0.20μg/mL辣根过氧化物酶，再加入0.01～2.5mL 1.01×10^-4mol/L葡萄糖溶液，用二次蒸馏水稀释至刻度2.5mL，摇匀，放置2～60分钟，然后加入0.10～0.60mL 2.00×10^-4mol/L罗丹明S溶液，用二次蒸馏水定容至4.0mL，摇匀，静置10分钟。于紫外可见分光光度计上，在波长526nm处测定吸光度值A_526nm；以不加葡萄糖，做试剂空白A₀，计算ΔA_526nm＝A₀-A_526nm值。另取葡萄糖注射液适量，同法测定吸光度值，可计算出注射液中葡萄糖的含量。

本发明测定方法灵敏度高、简便、快捷，仪器价廉，易操作。

附图说明

图1为本发明实施例葡萄糖的吸收光谱图。

具体实施方式

实施例：

在5mL具塞比色管中，分别加入0.15mL pH4.6的HAc-NaAc缓冲溶液和0.35mL 0.04mol/L KI溶液，然后加入0.60mL 0.20μg/mL辣根过氧化物酶，再加入0.01、0.05、0.10、0.20、0.30、0.35mL 1.01×10^-4mol/L葡萄糖溶液，用二次蒸馏水稀释至刻度2.5mL，摇匀，放置30分钟，然后加入0.35mL 2.00×10^-4mol/L罗丹明S溶液，用二次蒸馏水定容至4.0mL，摇匀，静置10分钟。于紫外可见分光光度计上，在波长526nm处测定吸光度值A_526nm；以不加葡萄糖，做试剂空白A₀，计算ΔA_526nm＝A₀-A_526nm值，其吸光度值A_526nm与葡萄糖浓度的线性回归方程为ΔA_526nm＝0.0152C-0.003。另取葡萄糖注射液适量，加水稀释，取适量，同法测定吸光度值，代入上述线性回归方程，可计算出注射液中葡萄糖的含量为50.73mg/mL。

测定葡萄糖的吸收光谱图见图1。