[发明专利]窿缘桉组织培养快速繁殖方法

权利要求书

1、窿缘桉组织培养快速繁殖方法，其特征在于该繁殖方法包括以下步骤：

1.1优良个体选择

选择窿缘桉实生林内单株桉叶油中桉叶素含量为60％以上的无病虫害个体为优树；

1.2外植体的采集、消毒

在优树离地面约30cm处进行环割树周长的2/3，割伤至韧皮部。待萌芽条生长至30～40cm时采集接种。将采回的枝条去除叶片后，用清水冲洗，再用沾有肥皂粉或洗洁精的软毛刷进行刷洗，后用去离子水清洗1～3次，将材料分成茎尖和茎段，用75％乙醇浸泡灭菌30s，蒸馏水冲洗1～3次后置于超净台，再用0.1％HgCI₂静置浸泡2～6min，用无菌水冲洗1～2次；然后再倒入0.1％HgCI₂，以振荡的方式进行灭菌处理3～6min，最后用无菌水冲洗5～8次；

1.3茎段的初始培养、增殖培养、生根培养

将消毒好的茎断接种到改良MS+6-BA0.1～0.5mg·L^-1+蔗糖30000mg·L^-1+琼脂3000mg·L^-1的培养基上进行诱导培养。培养条件为25±2℃，1000～1500LX，每天光照10～14h为宜。30d后将密集的小丛生芽分割为单株或丛芽小束，转接到改良MS+6-BA 1.5+IBA 0.5+蔗糖30000mg·L^-1+琼脂3000mg·L^-1的增殖培养基上，以促进培养物的腋芽和侧芽萌发；

将丛生芽中株高2～3cm的单芽剪下，接种到生根培养基中诱导生根；

1.4炼苗、出瓶移栽

单芽生根长0.5～1.0cm时，把生根苗搬出培养室，移至大棚练苗10～30d，苗高2.0～4.0cm，根长1.5～2.0cm时，移栽到红心土、木屑和泥炭土等混合的轻型基质中；

1.5苗木管理

移栽一周后，喷施0.1％的复合肥溶液，每周1～2次。10～15d后，搬到自然条件的网室培育。苗高15～35cm，地茎0.18～0.25cm可出圃造林。

2、根据权利要求1所述的窿缘桉组织培养快速繁殖方法，其特征在于所述改良MS培养基的组成为：

KNO₃              1900mg·L^-1

NH₄NO₃            1600mg·L^-1

CaCl₂.2H₂O        460mg·L^-1

MgSO₄.7H₂O        370mg·L^-1

CaNO₃.4H₂O        200mg·L^-1

KH₂PO₃            170mg·L^-1

MnSO₄.4H₂O        22.3mg·L^-1

ZnSO₄.7H₂O        8.6mg·L^-1

CuSO₄.5H₂O        0.025mg·L^-1

H₃BO₃             6.2mg·L^-1

Na₂MoO₄.2H₂O      0.25mg·L^-1 

KI                0.83mg·L^-1

CoCl₂.6H₂O        0.025mg·L^-1

维生素B1          0.4mg·L^-1

维生素B6          0.5mg·L^-1

烟酸      0.5mg·L^-1

甘氨酸    2.0mg·L^-1

肌醇      50mg·L^-1。

3、根据权利要求1所述的窿缘桉组织培养快速繁殖方法，其特征在于所述生根培养基的组成为：

1/2改良MS

IAA       1.5mg·L^-1

NAA       1mg·L^-1

蔗糖      30000mg·L^-1

琼脂粉    3800mg·L^-1。