[发明专利]一种化妆品中链球菌的检验方法

说明书

发明领域

本发明涉及化妆品微生物检验技术领域。具体的说，本发明涉及一种化妆品中细菌的检验技术领域。

背景技术

化妆品在人们的日常生活中使用很普遍，因此对其安全性的检测和评估显得尤为重要。化妆品因原料中存在油脂、蛋白质、淀粉、维生素、水分等众多营养性成分，为微生物的滋生和繁殖提供了良好的营养环境。虽然通过添加防腐剂来防止化妆品变质，但在生产和使用过程中仍无法避免微生物的污染。微生物将化妆品中的营养成分代谢分解，致使化妆品腐败变质，不仅使化妆品的色、香、味及剂型发生变化，而且带给使用者的健康造成严重危害。因此，化妆品中一些有害微生物的分离与检测是当前化妆品卫生质量控制的重要问题。

目前有关化妆品微生物检验标准通常只涉及到细菌总数、粪大肠菌群、绿脓杆菌、金黄色葡萄球菌四个项目，就安全性而言，现有检测标准明显存在滞后现象。实际上，污染化妆品的微生物种类很多，有细菌、真菌和酵母菌等。目前从化妆品中检出对人体致病的细菌有铜绿假单胞菌、金黄色葡萄球菌、肺炎克雷伯氏杆菌、粪大肠杆菌、蜡样芽孢杆菌和链球菌等；真菌主要有青真菌、曲真菌、交链孢真菌等。其中，链球菌能引起感染性疾病，如链球菌存在于化妆品中则易引起皮炎、毛囊炎和疖肿等现象，但是没有相应的检测方法。为不断加强对进出口化妆品的安全性检测，建立化妆品中链球菌的检验方法具有重要意义。

发明内容

针对目前没有建立起完整的检测化妆品中链球菌的检验方法，也未见国内外文献报道。化妆品中链球菌导致一些疾病实际一直困扰着人们。

本发明提供了一种化妆品中链球菌的检验方法。

本发明的技术方案：本发明针对化妆品中存在链球菌的可能性，并根据链球菌的特征，采用多种链球菌增菌培养基、多种链球菌分离培养基对不同种类化妆品进行链球菌的分离；并同时采用标准链球菌菌株人工污染化妆品后，对选择的多种链球菌增菌培养基、多种链球菌分离培养基进行确证实验。为此，本发明建立了一种化妆品中链球菌的检验方法。

本领域所熟知，链球菌广泛分布于大自然中，该菌呈圆形或卵圆形的革兰氏阳性细菌，无芽孢，无动力，过氧化氢阴性，不耐热，本发明通过反复实验确定建立一定培养条件，如培养基成分、培养温度和时间、PH等，建立起适合检测化妆品中链球菌的检验方法体系。

常见的大部分链球菌均采用鲜血平板和哥伦亚琼脂平板进行分离培养，对需进行前期增菌培养的链球菌均采用匹克氏增菌液、胰蛋白胨大豆肉汤(TSB)、营养肉汤、血清肉汤等增菌液。现已报道的链球菌分离方法，主要针对某一种类进行分离鉴定，如肺炎链球菌、猪链球菌、嗜热链球菌、溶血性链球菌等，而实际上，化妆品中为抑制细菌生长添加了一定的防腐剂，增加了对化妆品中链球菌的难度。

本发明根据化妆品中链球菌特性，首次采用SCDLP、脑心浸液培养基和叠氮钠葡萄糖肉汤作为前期增菌液，血琼脂、脑心浸液琼脂、KF琼脂作为分离培养基，建立了检测化妆品中链球菌的前增菌和分离实验整体检测技术体系。而本发明选择含有中和剂的SCDLP作为前增菌液作为本发明的关键技术点。

本发明具体的，针对化妆品中链球菌属的分离，采用了SCDLP作为前增菌液、血琼脂、脑心浸液琼脂作为分离培养基相互组合后而建成的化妆品中链球菌分离的完整检测方法。

本发明具体提供了一种化妆品中链球菌的检验步骤如下：

一、前期增菌培养

取1:10稀释样品10mL加入到90mLSCDLP液体培养基，置36℃±1℃、培养24小时。

二、分离培养

从培养液中挑取培养物，划线接种到血琼脂、脑心浸液琼脂平板上，置36℃±1℃培养24h。血琼脂上链球菌菌落特征：呈灰白色，半透明或不透明，表面光滑，有乳光，菌落直径约0.5mm-2mm。在脑心浸液琼脂平板上，其菌落呈灰白色，半透明或不透明，表面光滑，有乳光，菌落直径约0.5mm-2mm。

三、染色镜检

挑取可疑的菌落，革兰氏染色，镜检为链状或双排列的革兰氏阳性球菌。

四、接触酶实验

取一块洁净的白色滤纸片放在灭菌平皿内，用接种环挑取链球菌可疑菌落涂在滤纸片上，然后加一滴3％过氧化氢溶液，30s之内，出现气泡者为阳性，不发生气泡者为阴性。

五、万古霉素实验

挑取可疑的菌落接种于已加入万古霉素(0.5μg/L-4.0μg/L)的脑心浸液琼脂培养基中，置36℃±1℃培养18-24h。链球菌均不能生长。