[发明专利]乳腺良恶性肿瘤血清特异蛋白及其应用

说明书

技术领域

本发明涉及生物检测技术领域，尤其是涉及了一种新的肿瘤标志物-乳腺肿瘤早期血清特异蛋白，可在体外检测区分乳腺良性病变与乳腺癌的发生。

背景技术

乳腺癌(mammary carcinoma)是乳房腺上皮细胞在多种致癌因子作用下，发生了基因突变，致使细胞增生失控。乳腺癌是人类最常见的一种恶性肿瘤，也是女性主要恶性肿瘤之一。各国因地理环境、生活习惯的不同，乳腺癌的发病率有很大差异。北美和北欧大多数国家是女性乳腺癌的高发区，南美和南欧一些国家为中等，而亚洲、拉丁美洲和非洲的大部分地区为低发区。据美国癌症协会估计，美国每年有12万乳腺癌新发病例，发病率为72.2/10万，1976年死于乳腺癌的人数为33000。乳腺癌在我国各地区的发病率也不相同，在世界上我国虽属女性乳腺癌的低发国，但近年来乳腺癌的发病率明显增高，尤其沪、京、津及沿海地区是我国乳腺癌的高发地区。以上海最高，1972年上海的乳腺癌发病率为20.1/10万，1988年则为28/10万，居女性恶性肿瘤中的第二位。其症状主要表现为肿块、疼痛、乳头溢液、乳房皮肤与外形改变等。

乳腺良性疾病通常包括纤维囊性乳腺疾病(乳腺纤维瘤、乳腺囊性增生病)、多乳瘤病、乳腺大导管乳头状瘤、脂肪瘤、乳房平滑肌瘤、慢性乳腺炎、乳房发育失常、囊肿等，其绝大部分不会发生癌变成为恶性肿瘤即乳腺癌，基于乳房对于女性的重要意义，没有必要一发现就手术切除。然而这些乳腺良性肿瘤的症状却与恶性肿瘤相似，因此在良、恶性肿瘤的临床诊断上出现困难，医生为前来就诊诉说有肿块的患者所做的最重要的事就是确定肿块是不是癌。如果能找到一种方法对乳腺肿块进行快速高效的检测，用以区分良、恶性肿瘤，不仪可以大大降低治疗费用，而且可以避免患者出现不必要的心理压力。现有的区分乳腺良恶性肿瘤的标志物有CA153等，但其灵敏度和特异性远达不到要求。

蛋白质是生命活动的最终执行者，肿瘤细胞基因的改变最终也都会反映在蛋白质的改变上，因此在肿瘤细胞的发生、发展以及侵袭转移过程中必定伴随着蛋白质种类与数量的改变，并且这些蛋白质有可能释放入血。从理论上讲，通过检测血清中蛋白质的动态变化就有可能筛查出与肿瘤相关的蛋白质，作为疾病早期的指标对肿瘤发生的危险性进行早期评估。近几年来，蛋白质组学的快速发展使我们从血清中寻找肿瘤特异相关蛋白质成为可能，尤其是质谱技术的产生，凭借其高灵敏度、高通量、快速简便等优点，已经成为微量蛋白质检测的最重要手段之一。

SELDI-TOF-MS即蛋白质芯片和质谱技术相结合的表面增强激光解吸电离飞行时间质谱仪技术，该技术中的蛋白质芯片具有高度并行性、高通量、微型化和自动化等其他方法难以比拟的优越性，同时该芯片采用光敏染料标记，灵敏度高，准确性好，使筛选低丰度小分子蛋白质甚至肽成为现实，弥补了传统方法如色谱、光谱、凝胶电泳等技术的不足，对筛选和鉴定新的肿瘤相关特异性标志物产生了巨大的影响。同时，该质谱技术可以直接对血清样品进行鉴定，方便快速，半天即可得出结果，提供了临床应用的价值。

从包括中国专利在内的有关资料检索表明，自2001年以来，应用SELDI技术对血清样品进行检测来寻找新的肿瘤标志物用于肿瘤的早期诊断，成为了肿瘤研究的热点之一。美国的多家蛋白质组学研究机构已用该技术分别对卵巢癌、前列腺癌等体液样本进行了研究，发现了新的标志物，其特异性和灵敏度均优于现有的检测方法。国内也应用该技术对肺癌、结直肠癌、乳腺癌、肝癌等部分肿瘤进行了研究，得到了一些肿瘤标志物，取得了一些成果和专利。如专利申请号为200410053632.0，200410066304.4，200510080787.8等。但目前尚未有对乳腺良恶性肿瘤进行区分的研究，因此应用质谱技术对乳腺良恶性肿瘤患者血清进行分析来获得特异的肿瘤标志物，具有重要的意义。

发明内容

为了克服现有技术的不足，本发明的目的是建立一套有效的方法，用于在分离的血清中体外检测区分乳腺良恶性肿瘤。即应用SELDI-TOF-MS技术，通过建立乳腺良性肿瘤患者与乳腺癌患者之间血清蛋白质的指纹图谱，并进行差异分析，寻找新的差异蛋白质标志物，从而对乳腺的良、恶性肿瘤进行区分。

本发明解决其技术问题所采用的技术方案是：本发明提供了一种从分离的外周血血清中体外检测乳腺疾病的患者发生危险性的方法，该方法包括下列步骤：

(a)制备乳腺癌患者的血清样本；

(b)利用表面增强激光解吸电离飞行质谱技术(SELDI-TOF-MS)检测血清样品，获得血清蛋白质谱；