[发明专利]肠出血性大肠杆菌O157：H7志贺毒素ⅡB表位肽及其应用

说明书

技术领域

本发明涉及医药生物技术领域，尤其涉及肠出血性大肠杆菌O157:H7志贺毒素IIB表位肽及其应用。

背景技术

肠出血性大肠杆菌(EHEC)O157:H7为重要的新发人畜共患传染病原，其引发的食物中毒在世界各地包括中国均有大规模的暴发流行。2006年在美国爆发的波及26个州的毒菠菜事件就是由该菌污染所致，1999年末至2000年初，在我国东部部分地区发生了迄今为止世界上最大规模的O157:H7感染爆发流行，因此，该菌的感染已经成为一个全球性的公共卫生问题。由于EHEC O157:H7菌培养容易、感染力强、传播途径多样，使O157菌极有可能作为未来军事斗争的细菌武器和生物恐怖战剂。美国疾病控制中心(CDC)已将EHEC O157菌列为B类生物恐怖病原体严加防范。此外，EHEC O157:H7菌的烈性致病因子还有可能用于新型生物武器——基因武器的构建。

然而目前对其感染尚缺乏有效的防治方法。研究证明：抗生素可促使O157菌释放致死性志贺毒素(Shiga toxin，Stx)，从而使患者病情加重。2002年中国国家卫生部制定的“肠出血性大肠杆菌O157:H7感染性腹泻应急处理预案(试行)”第5条规定：肠出血性大肠杆菌O157:H7病人和疑似病人禁止使用抗生素。因此，无论从公共卫生还是生物反恐的需要出发，探索新的治疗手段迫在眉睫。

研究表明：志贺毒素II(Stx2)是O157:H7主要的致病因子。Stx2进入血液循环后，可引起靶组织器官，如肾小球和结肠内皮细胞的损伤，最终导致溶血性尿毒综合征(HUS)及血栓性血小板减少紫癜(TTP)等严重并发症的发生。因此，Stx2是目前治疗O157:H7菌感染的药物研究的主要靶标。

Stx2毒素由1个A亚基(32KDa)和5个B亚基(7.7KDa/单体)组成。Stx2通过B亚基与受体Gb3结合后，进入细胞内质网A亚基被裂解为A1和A2两个片段后，A1片断经内质网进入细胞质作用真核生物核糖体28SrRNA，导致蛋白质合成停止。这种作用会导致肾内皮细胞、肠上皮细胞、Vero细胞、Hela细胞或其他任何具有Gb3受体的细胞的死亡。

鉴于Stx2的结构和致病其机理，针对Stx2的药物研究主要集中在Stx2的疫苗和中和性抗体的研究，但目前国内外尚无Stx2的疫苗和中和性抗体上市。

鉴于以上研究背景本发明预测并和成了Stx2A1毒性亚单位上的B细胞表位，并对预测的B细胞表位的免疫原性和免疫保护性进行了鉴定，本发明的B细胞表位肽可用于EHEC O157:H7感染的肽疫苗研究和利用B细胞表位肽制备Stx2特异的单克隆抗体诊断和治疗O157:H7的感染。

发明内容

本发明的一个目的是提供一种来自肠出血性大肠杆菌O157:H7Stx2A1毒性亚单位的B细胞表位肽，其具有下述氨基酸序列中的至少一种：

1)SEQ ID NO：1、SEQ ID NO：2、SEQ ID NO：3或SEQ ID NO：4所示的氨基酸序列；

2)将所述SEQ ID NO：1、SEQ ID NO：2、SEQ ID NO：3或SEQ ID NO：4所示的氨基酸序列经过一个或几个氨基酸残基的替换、缺失或添加而仍具有所述氨基酸序列功能的氨基酸序列。

本发明的另一目的是提供一种编码上述的来自肠出血性大肠杆菌O157:H7Stx2A1毒性亚单位上的B细胞表位肽的核苷酸序列，其具有下述核苷酸序列中的至少一种：

1)SEQ ID NO：5、SEQ ID NO：6、SEQ ID NO：7或SEQ ID NO：8所示的核苷酸序列；

2)与所述SEQ ID NO：5、SEQ ID NO：6、SEQ ID NO：7或SEQ ID NO：8所示的核苷酸序列不同但具有相同编码产物的核苷酸序列。

本发明的另一目的是提供上述的来自肠出血性大肠杆菌O157:H7志贺毒素II A1亚单位的B细胞表位肽的应用，其可用于制备预防或治疗肠出血性大肠杆菌感染的药物组合物，或制备单克隆抗体。

本发明所述的预防或治疗肠出血性大肠杆菌感染的药物，其包含上述的来自肠出血性大肠杆菌O157:H7志贺毒素II A1亚单位的B细胞表位肽和药学上可接受的载体，其中上述的药学上可接受的载体包含稀释剂、赋形剂、填充剂、粘合剂、湿润剂、崩解剂、吸收促进剂、表面活性剂、吸附载体中的至少一种。如本发明的B细胞表位肽可以与佐剂不耐热肠毒素一起组成药物制剂后口服，与铝佐剂一起组成药物制剂静脉输注射。