[发明专利]一种保持高青蒿素含量的青蒿无性繁殖方法

说明书

技术领域

本发明涉及一种青蒿无性繁殖方法，特别涉及一种保持高青蒿素含量的青蒿无性繁殖方法。

背景技术

青蒿即菊科植物黄花蒿(Artemisia annua L.)，是我国传统的中药材，具有清热凉血、清暑截疟的功效，民间用于治疗高热不退、中暑、皮肤瘙痒、荨麻疹、脂溢性皮炎等。青蒿素(artemisinin)是我国科技工作者首次从青蒿中分离出的抗疟单体，被世界卫生组织推荐为治疗疟疾的首选药物，具有高效、速效、低毒的特点，而且在治疗癌症、艾滋病及其并发症上也显示出潜在的前景。因此，世界各国都在加紧开展青蒿素及其衍生物的开发研究。

目前青蒿素主要是从青蒿中提取获得。种子繁殖田间栽培是目前获得青蒿植物的主要途径。但在天然青蒿中，青蒿素含量普遍偏低，且不稳定，又因受地理环境、采集时期、采集部位、气温和施肥等因素的影响，品质不易控制。世界大部分地区的天然青蒿中的青蒿素含量都低于0.5％，不具备工业利用价值，具有提取价值的青蒿资源主要分布在我国长江以南地区，远远不能满足国际抗疟药市场对青蒿素的需求。为适应市场的需要，现正进行大量的青蒿人工栽培。目前，虽然有高青蒿素含量群体的报道，但即使在生态环境非常适宜的地区，不同群体的青蒿及来源于同一株系的种子，在同一地块的不同单株之间，其青蒿素的含量差异很大，目前还没有真正意义上的遗传纯合一致的栽培品种。近年来，人们试图从野生资源出发选育出青蒿素含量高的青蒿品种，但由于青蒿存在“自交不亲和”性，属于异花授粉植物，这一特征使得通过有性繁殖将高产株系的性状保存下来很困难。因而即使有含量较高的株系也是不稳定遗传的，其后代往往差异很大，这也是青蒿植株个体间青蒿素含量差异较大的原因所在。故而保持青蒿素含量稳定是青蒿栽培和育种中要解决的主要问题。

发明内容

本发明的目的在于提供一种保持高青蒿素含量的青蒿栽培方法。该技术采用植物生长调节剂处理高青蒿素含量侧枝并扦插的无性繁殖方法，克服了青蒿由于“自交不亲和”性引起的高青蒿素含量植株后代株系遗传不稳定的缺点，为实现青蒿素含量保持在较高水平的大规模工厂化栽培提供了技术保障。

为了达到这一目的，本发明的具体实施方案为：一种保持高青蒿素含量的青蒿无性繁殖方法--扦插。其特征在于包括以下步骤：

(1)采用常规的方法测定植株青蒿素含量，选择青蒿素含量高于0.5％的株系；

(2)从上述青蒿植株中选取花蕾期前的一级侧枝或二级侧枝，倾斜剪切15cm-50cm青蒿侧枝；

(3)采用1g/L-3g/L萘乙酸或引哚乙酸浸泡上述剪切侧枝截面端20-60秒；

(4)扦插上述激素处理后的青蒿侧枝截面端于基土中，并进行生根期间的温度、湿度和营养管理，直到扦插青蒿侧枝生根；

(5)将已生根扦插青蒿侧枝移栽至大田，移栽后定期浇水，进行田间管理。

上述步骤(1)中，所述青蒿中青蒿素含量测定方法为：分别采收同一株青蒿上、中、下叶片，60℃干燥2小时，称取50g-100g样品装入500ml分液漏斗中，加入200ml石油醚于60℃-80℃浸提，2h后浸液滤出，加入200ml石油醚第二次浸提2h，浸液滤出，再加入200ml石油醚第三次浸提1h，三次浸提液合并。然后将浸提液上样到硅胶柱，采用乙酸乙酯：石油醚(1∶19)洗脱，直到无青蒿素为止(当洗脱体积达700-1700ml时青蒿素基本洗脱完全)。80℃旋转蒸发浓缩洗脱溶液，用石油醚洗涤结晶，60℃-80℃干燥。准确称重青蒿素结晶，计算青蒿素含量(青蒿素结晶重/样品干重)。

上述步骤(2)中，所述青蒿插条来自青蒿素含量高于0.5％的株系。

上述步骤(3)中，所述剪切侧枝截面端1cm-3cm浸泡于萘乙酸或引哚乙酸溶液中。

上述步骤(4)中，所述扦插方法为：将激素处理后的青蒿侧枝截面端埋于基土中3cm深处，外面套塑料薄膜袋。扦插后每三天浇水一次，每周施0.1倍浓度的MS盐溶液一次。扦插后7天内，要求保持空气湿度在85％以上，以后可逐渐降低。10天以后把塑料膜掀开一角，20天后全部掀开。25-30天后侧枝生根良好，平均侧根长可达25cm左右，通过该方法所得的青蒿侧枝生根率为100％。

上述步骤(5)中，所述移栽存活率可达100％。